銀杏酸的熒光特征和光熱穩定性研究

　　銀杏酸是6烷基或6烯基水楊酸的衍生物，六位上的側鏈碳原子數可從13至19，側鏈雙鍵數可為0至3個(gè)，因此，銀杏酸是一混合物，有抗菌作用。下面是小編搜集的一篇相關(guān)藥學(xué)論文范文，歡迎閱讀查看。

　　【摘要】目的研究銀杏酸的熒光特征，探討光、熱對銀杏酸穩定性的影響。方法通過(guò)熒光掃描研究溶劑、pH值對銀杏酸熒光特性的影響，建立檢測銀杏酸的熒光分光光度法。結果銀杏酸在pH 4.0甲醇溶液中熒光強度較強，激發(fā)波長(cháng)279 nm，發(fā)射波長(cháng)404 nm時(shí)，銀杏酸在0.221～20.31 μg/ml濃度范圍內與熒光強度呈現良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數為R=0.997 5;檢測限0.023 5 μg/ml。結論銀杏酸溶液對光不穩定，隨光照時(shí)間延長(cháng)濃度降低;銀杏酸溶液在5℃時(shí)穩定，25℃時(shí)穩定性有所下降，并隨溫度升高或加熱時(shí)間延長(cháng)降解率增大。該方法可用于測定光照、加熱對銀杏酸的影響。

　　【關(guān)鍵詞】 銀杏外種皮 銀杏酸 熒光分光度法 光穩定性 熱穩定性

　　Abstract：ObjectiveTo study the fluorescence characteristics and the heat and sunlight stability of ginkgolic acid. Methods The effects on fluorescence characteristics of ginkgolic acids with different solvent, different pH media were studied by fluorescence scan. A fluorescence spectrophotometry for determination of ginkgolic acids was established. ResultsIt was found that in the pH4.0 methanol the fluorescence signal of ginkgolic acids was strong.When the excitation and emission wavelength Ginkgolic acid were at 279 and 404 nm respectively, the linear range was 0.221～20.31 μg/ml, correlative coefficient was 0.997 5, and the detection limit was 0.0235 μg/ml. ConclusionGinkgolic acids is unstable to sunlinght. Ginkgolic acids is stable when being exposed to 5℃ condition, but its stability depressed when being exposed over 25℃ conditions. The method can be used to analyze the heat stability and sunlight stability of ginlgolic acids.

　　Key words： Ginkgolic acids; Fluorescence spectrophotometry; Sunlight stability; Heat stability

　　銀杏酸(Ginkgolic acids, GA)屬于6-烷基或者6-烯基水楊酸的衍生物，其苯環(huán)6位碳鏈長(cháng)度13-17，雙鍵數0-2，為5種同系物所組成的混合物，存在于銀杏的葉、果和外種皮中，以外種皮中含量為高。銀杏酸能抑制多種細菌、真菌的生長(cháng)，并能誘導腫瘤細胞的凋亡。作者發(fā)現銀杏外種皮石油醚提取物具有突出的殺釘螺活性[1]，銀杏酸是其中的主要活性成分 [2]，因此銀杏酸被認為是一種極具價(jià)值的殺螺劑或先導化合物。作為一種植物來(lái)源的殺釘螺劑，銀杏酸的穩定性在其使用中具有重要的意義。而到目前為止，國內外尚未見(jiàn)相關(guān)報道。

　　目前已報道的銀杏酸分析方法主要有HPLC-UV法[3]和HPLC-MS聯(lián)用法[4]、紫外分光光度法[5]和熒光分光光度法[6]。HPLC法測定精密度高，但對儀器要求高，分析操作復雜，成本較高;紫外分光光度法簡(jiǎn)便但靈敏度較低;而熒光分光光度法在操作簡(jiǎn)便的同時(shí)具有較高的靈敏度。田亞平[6]以白果酸為標準品采用熒光分光光度法測定銀杏外種皮中銀杏酸的含量。筆者采用從銀杏外種皮中分離的銀杏酸為標準品研究其熒光特征時(shí)，發(fā)現與田亞平報道有所差異，因此對銀杏酸的熒光特征進(jìn)行詳細研究，建立了熒光法測定銀杏酸的方法，研究了銀杏酸在不同溫度條件和光照下的穩定性。

　　1、儀器與試劑

　　Cary Eclipse熒光分光光度計(美國VARIAN公司);JASCO LC-1500 高效液相色譜儀(日本分光公司)，配有PU-1580泵，PG-1580-54四通道在線(xiàn)脫氣，FP-1520熒光檢測器，N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智達信息工程有限公司);Sartorius BS 124S 分析天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)。銀杏酸標準品由本實(shí)驗室自制，經(jīng)HPLC測定純度>98%(與H.Jaggy博士贈送的分析純度99%以上的銀杏酸對照品比較)。銀杏酸標準品用無(wú)水甲醇配制成1.05 mg/ml的貯備液。銀杏酸標準溶液的制備：精密吸取1.05 mg/ml的銀杏酸貯備液用無(wú)水甲醇溶解定容于10 ml容量瓶，即配制成濃度為105 μg/ml的工作溶液。

　　其余試劑均為分析純，水為去離子水二次蒸餾。

　　2、方法與結果

　　2.1 溶劑對銀杏酸熒光強度的影響取銀杏酸標準品分別以DMF、甲醇、丙酮、乙醇、正丁醇、甲醇-水(7∶3)，乙腈為溶劑配成100 μg/ml進(jìn)行熒光掃描;實(shí)驗溫度為(25±0.5)℃，激發(fā)和發(fā)射狹縫為5 nm，激發(fā)和發(fā)射單色器的掃描速度均為500 nm·min-1。銀杏酸標準品在不同溶劑中的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜分別見(jiàn)圖1。

　　在丙酮溶液中銀杏酸熒光特性消失;在DMF溶液中銀杏酸發(fā)生熒光淬滅;在正丁醇溶液中銀杏酸的發(fā)射強度很微弱。在其它4種溶液中，銀杏酸都出現位于229 nm和279 nm處的兩個(gè)熒光激發(fā)峰，和位于404 nm和552 nm附近的兩個(gè)熒光發(fā)射峰。比較發(fā)現甲醇溶液中銀杏酸激發(fā)熒光性最強。綜合考慮銀杏酸的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，選擇甲醇溶液為溶劑，激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)分別為279 nm和404 nm。

　　2.2 pH條件對銀杏酸熒光強度的影響以甲醇-水(7∶3)為溶劑，配制100 μg/ml銀杏酸標準液，分別在不同pH條件下測定其熒光強度。在pH值2～8之間，使用磷酸鹽緩沖體系;在pH值9.00～10.00之間，使用碳酸鹽緩沖體系，熒光測定條件同“2.1”項。

　　測定了不同pH條件下銀杏酸的相對熒光強度，結果發(fā)現隨著(zhù) pH值的增加，銀杏酸的熒光強度略有上升，當pH>4時(shí)，熒光性超過(guò)儀器檢測最高值,這與文獻[6]報道一致。因此選擇在pH 4.0條件下進(jìn)行熒光測定。

　　2.3 高效液相-熒光法分析干擾物的影響色譜條件：大連Elite Sino Chrom ODS-AP色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);熒光檢測器，激發(fā)波長(cháng)279 nm，發(fā)射波長(cháng)404 nm;流動(dòng)相：甲醇-3%HAC水溶液(92∶8，V/V);流速1.0 ml/min，柱溫40℃。銀杏酸標準品的高效液相-熒光色譜圖見(jiàn)圖2。由圖2可見(jiàn)銀杏酸標準品的高效液相熒光圖上未見(jiàn)熒光雜質(zhì)，故可直接采用熒光分光光度計直接進(jìn)行測定。

　　2.4 熒光分光光度法的線(xiàn)性范圍和檢測限將銀杏酸工作液稀釋成一系列濃度，按試驗方法分別測定在404 nm下的熒光強度，以熒光強度對相應濃度作圖，繪制標準曲線(xiàn)。在相同條件下測定樣品溶液中銀杏酸的熒光強度，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算其含量。

　　配制一系列不同濃度銀杏酸工作液，按實(shí)驗方法在激發(fā)波長(cháng)279 nm，發(fā)射波長(cháng)404 nm的條件下，以無(wú)水甲醇作為空白，測定銀杏酸標準工作溶液的熒光強度，發(fā)現銀杏酸濃度在0.221～20.31 μg/ml范圍內與熒光強度呈現良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程為：Y=44.19X+82.80，相關(guān)系數為R2=0.995; 相對標準偏差為2.1%(n=10)。取20份空白液測定其熒光強度，以3倍標準偏差計算其檢測限為0.023 5 μg/ml。

　　2.5 準確度與精密度

　　2.5.1 精密度考察取0.1 mg/ml銀杏酸溶液1 ml于10 ml容量瓶中，無(wú)水甲醇定容，測定其熒光強度，重復5次，得銀杏酸溶液的RSD為0.47%(n=5)。

　　2.5.2 準確度考察取0.1 mg/ml銀杏酸溶液1 ml于10 ml容量瓶中，無(wú)水甲醇定容，測定其熒光強度，重復5次，得銀杏酸溶液的RSD為0.75%。

　　2.6 樣品分析

　　準確稱(chēng)取一定量的銀杏酸對照品以甲醇定容，作為樣品溶液，分別按本法和文獻[3]HPLC-UV分析條件進(jìn)行檢測，結果見(jiàn)表1�？梢�(jiàn)熒光分光法與HPLC法測定結果基本一致，因此可以采用熒光光度法進(jìn)行樣品中銀杏酸含量的分析。表1 采用熒光光度法與高效液相色譜法測定銀杏酸結果的比較(略)

　　2.7 銀杏酸光、熱穩定性準確移取銀杏酸工作液15 ml于具塞比色管中，密封后分別置于5，25，40，70℃恒溫，每間隔24 h取樣，測定銀杏酸的含量，求出分解率。每處理設置3個(gè)平行。

　　準確移取銀杏酸工作液20 ml置于直徑為9 cm的石英比色皿中，封口后將石英比色皿放置在陽(yáng)光下照射(每天8 h，夜間或陰天將比色皿保存于冰箱);一份表面皿用鋁箔遮蓋，并放置在陰暗處對比。每間隔24 h定時(shí)取樣，測定銀杏酸的含量，求出分解率。光照實(shí)驗在距離地面15 m的樓頂平臺進(jìn)行，光照時(shí)候保持石英比色試管與太陽(yáng)光線(xiàn)成30。角，測定光強為35 000～65 000 Lx，黑暗對照以鋁箔包裹同樣條件下光照，每處理設置3個(gè)平行。

　　銀杏酸置于5，25，40，70℃恒溫水浴鍋中分別恒溫1，2，3，4，5，6 d后，銀杏酸的濃度變化見(jiàn)圖3～4。

　　由圖3 可見(jiàn),銀杏酸在5℃時(shí)穩定,濃度不發(fā)生變化;溫度升至25℃以上，隨著(zhù)處理時(shí)間的延長(cháng)，濃度略有下降，溫度越高，銀杏酸濃度降低越多，說(shuō)明高溫對銀杏酸的穩定性有較大影響;由圖4可見(jiàn)，在太陽(yáng)光照射下，銀杏酸的濃度隨照射時(shí)間的延長(cháng)而降低。說(shuō)明銀杏酸具有熱、光的不穩定性。

　　3、結論

　　本法具有簡(jiǎn)便，檢測限低的特點(diǎn)，測定結果與HPLC法基本吻合，可用于銀杏酸純品的分析。如樣品中含有熒光雜質(zhì)，則測定前必須進(jìn)行純化。由分析結果可知銀杏酸在高溫和光照條件下不穩定，在自然條件下能夠降解。

　　【參考文獻】

　　[1]陳盛霞，楊小明，吳亮，等.銀杏外種皮提取物滅釘螺效果的研究[J].中國寄生蟲(chóng)與寄生蟲(chóng)病雜志，2007，25(1)：45.

　　[2]楊小明，陳盛霞，張蓉仙，等.銀杏外種皮石油醚提取物的殺釘螺活性研究[J].中國人獸共患病學(xué)報，2006，11(10)：961.

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　　[4]Ndjoko K, Wolfender J-L,Hostettmann K. Determination of trace amounts of ginkgolic acids in Ginkgo biloba L.leaf extracts and phytopharmaceuticals by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry[J]. J Chromatogr B,2000, 744:249.

　　[5]仰榴青, 吳向陽(yáng)，陳鈞.銀杏酸的分光光度法測定[J].分析化學(xué),2004 , 32(5):661.

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