- 相關(guān)推薦
血型鑒定和交叉配血技術(shù)的進(jìn)展
醫學(xué)界在輸血治療手段出現之初，曾發(fā)生過(guò)無(wú)數血的教訓。1492年，首例輸血由于使用的方法很原始，沒(méi)有成功病人死亡;1667年法國國王御醫Jean用羊血治療精神病患者，償試將動(dòng)物血輸給人導致死亡，這一嚴重事故使以后150多年沒(méi)人再敢嘗試輸血治療。1818年，英國產(chǎn)科醫生James Blundell首次用人血輸治患者，取得一定效果。1900年奧地利維也納大學(xué)科學(xué)家Karl Landsteiner發(fā)現ABO血型及Rh血型系統，增加了人類(lèi)對血型系統的認識。直到1907年，Hektoen建議通過(guò)獻血者和受血者之間的交叉配血才提高了輸血的安全性，Reuben Ottenberg完成了首例使用血型和交叉配血的輸血實(shí)驗，開(kāi)啟了現代輸血醫學(xué)的新紀元職稱(chēng)論文。
輸血前試驗包括血型鑒定、抗體篩選和交叉配血，其中交叉配血是關(guān)鍵[1]。交叉配血是在血型鑒定的基礎上，進(jìn)一步證實(shí)血型測定是否有誤，以及受血者和供血者之間是否存在血型不合的抗原抗體反應，以保證受血者的輸血安全。這一試驗對于未進(jìn)行紅細胞血型抗體篩選的患者尤為重要，紅細胞血型抗體有完全抗體和不完全抗體。完全抗體為分子量較大的IgM抗體，可在鹽水介質(zhì)的交叉配血中與相應的紅細胞發(fā)生凝集反應;不完全抗體指ABO系統以外的其他血型抗體，為分子量較小的IgG抗體，在鹽水介質(zhì)中雖然能夠結合紅細胞上的抗原，但不能使紅細胞凝集，必須通過(guò)特定的方法使致敏紅細胞發(fā)生凝集。根據紅細胞血型抗體的特性，血型鑒定和交叉配血方法在不斷產(chǎn)生，其檢測技術(shù)也在不斷發(fā)展。
1、鹽水交叉配血法
鹽水法配血時(shí)，用生理鹽水配制紅細胞懸液，紅細胞膜上由于唾液酸中的羧基離子而帶負電，此負電荷形成的排斥力 (Zeta 電位) 使單個(gè)紅細胞之間保持一定的距離，當其與血清相配合時(shí)，血清中的大分子完全抗體，能在相應紅細胞之間搭橋，使其發(fā)生凝集，通過(guò)觀(guān)察凝集或溶血來(lái)判斷配血結果。鹽水法是交叉配血的必做項目，能簡(jiǎn)便快速的檢測IgM型抗體，發(fā)現血型是否錯誤或判斷是否發(fā)生溶血，但不能檢出不完全IgG型抗體[2,3]，不能有效的防止免疫性溶血性和非溶血性輸血反應的發(fā)生，因此單用鹽水法配血存在一定的危險性。
2、抗人球蛋白交叉配血法(AGT)
1908年Carlo Moreschi利用分子搭橋的原理記錄了抗人球蛋白試驗。此法又稱(chēng)Coombs試驗，分為檢測紅細胞表面有無(wú)不完全抗體的直接抗人球蛋白試驗和檢測血清中有無(wú)不完全抗體的間接抗人球蛋白試驗，是最經(jīng)典、最早用于檢查不完全抗體的方法，是目前交叉配血的金標準。本法靈敏，但是傳統的抗人球方法，操作繁雜、反應時(shí)間較長(cháng)、結果不易判斷和統一、試劑效期短，不能滿(mǎn)足輸血檢測及時(shí)準確的要求，因而未被國內廣泛采用。
3、酶介質(zhì)交叉配血法
酶法是采用蛋白水解酶(如菠蘿酶、木瓜酶等)進(jìn)行配血的方法。酶可以破壞紅細胞表面帶電荷的唾液酸，從而降低紅細胞表面電荷，使其得以靠攏，因而能使具有特異性的不完全抗體與經(jīng)酶處理的具有相應抗原紅細胞發(fā)生凝集。此法的特點(diǎn)是操作較為簡(jiǎn)便，經(jīng)濟，但較難質(zhì)控，時(shí)間長(cháng)，實(shí)驗重復性較差，而且酶可能部分的改變紅細胞結構，使某些隱蔽的抗原得以暴露，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性;有的抗原經(jīng)過(guò)消化后便消失活力，真陽(yáng)性變成假陰性。因此，此法也有一定的局限性。
4、凝聚胺交叉配血法(MPT)
1980年P(guān)alezari和Jiang首先將凝聚胺技術(shù)應用在血庫作業(yè)上。凝聚胺交叉配血，是利用低離子介質(zhì)減少紅細胞周?chē)年?yáng)離子云，以促進(jìn)紅細胞與血清或血漿中抗體結合。聚凝膠分子是帶有高價(jià)陽(yáng)離子多聚季鍍鹽，溶解后帶有很多正電荷可以中和紅細胞表面負電荷，有利于紅細胞凝集，低離子強度溶液也能減低紅細胞的Zeta電位，可進(jìn)一步增加抗原抗體間的吸引力。當血清中存在IgM或IgG類(lèi)血型抗體時(shí)，與紅細胞發(fā)生緊密結合，此時(shí)加入枸櫞酸鹽解聚液以消除聚凝膠的正電荷，使IgM或IgG類(lèi)血型抗體與紅細胞產(chǎn)生凝集不會(huì )散開(kāi);如果血清中不存在IgM或IgG類(lèi)血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集消失。此法可以檢出IgM與IgG兩種性質(zhì)的抗體，能發(fā)現可引起溶血性輸血反應的幾乎所有完全與不完全抗體。據報道，凝聚胺法應用于血型鑒定、交叉配血、不完全抗體的篩選，其靈敏度及特異性遠高于其他介質(zhì)的1-250倍，尤其是Rh系統抗體，但對IgG抗-AB抗體的檢出能力較低[4，5，6]。此法操作簡(jiǎn)便、快速，在一些基層醫院均已廣泛使用。聚凝胺法雖然簡(jiǎn)便快速，但有可能漏檢重要的Kell血型系統[7]及血液中低效價(jià)的不規則抗體[8]，而且易受到溫度、氣候、臨床藥物、試劑及操作因素的干擾，而使交叉配血出現一些異常結果[9]。
5、微柱凝膠交叉配血法(MGT)
又稱(chēng)微管(板)凝膠抗球蛋白試驗。1988年發(fā)明的微柱凝膠配血法使抗人球蛋白應用于輸血常規檢測成為現實(shí)，它保持了傳統抗球蛋白試驗的準確性，而且方法簡(jiǎn)單，易于批量操作[10]，是新發(fā)展的一項免疫學(xué)檢測技術(shù)。此法可在全自動(dòng)血型分析儀上進(jìn)行，成為國際安全輸血檢查的推薦方法，目前國外已廣泛應用[11]。
微柱凝膠法是凝膠過(guò)濾技術(shù)和抗原抗體反應的結合，在微量柱中充滿(mǎn)特制的凝膠介質(zhì)或細小的玻璃珠介質(zhì)，介質(zhì)之間的間隙只能使單個(gè)紅細胞變形通過(guò)，起到類(lèi)似細胞篩的作用。紅細胞與相應抗體發(fā)生凝聚反應，經(jīng)離心后不能完全到達柱的底部，而呈現陽(yáng)性，全部沉到底部者為陰性。微柱依據血清反應特點(diǎn)和試劑不同分為不含特異性抗體的中性柱、含特異性抗體的特異性柱、用于檢測IgG類(lèi)不完全抗體和交叉配血的抗球蛋白柱。此法基本原理雖然與抗人球蛋白法相同，但一般認為抗人球蛋白更為可靠，而微柱凝膠法有發(fā)生漏檢的可能。這是因為微柱凝膠法需要在凝膠內離心，少量微弱凝集的紅細胞在離心外力的作用下可能會(huì )散開(kāi)，或者由于具有易變性的紅細胞在通過(guò)凝膠孔時(shí)變形通過(guò)，從而使微弱陽(yáng)性凝集漏檢。與手工凝聚胺MPT法相比，微柱法靈敏度高，能捕捉到十分微弱的抗原抗體反應因而結果更準確，交叉配血時(shí)其靈敏度較MPT法高約1-5個(gè)滴度[12]。微柱凝膠法具有操作簡(jiǎn)便、結果穩定、重復性好、標本用量少且結果可保存等優(yōu)點(diǎn)，試驗時(shí)增加了孵育步驟，也減少了冷凝集對實(shí)驗結果的影響。但有文獻[6]報道，微柱凝膠法對致敏紅細胞和IgG抗-AB血清的檢出能力低于抗人球蛋白法和凝聚胺法，對IgG抗-D血清的檢出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法;且紅細胞懸液濃度過(guò)高時(shí)因離心力不足或離心時(shí)間過(guò)短、血清中含纖維蛋白出現細胞凝塊或血液標本被細菌污染、血漿中的蛋白質(zhì)(包括IG和補體)非特異性的吸附到患者的紅細胞表面而發(fā)生非特異性凝集反應[13]。
6、現狀及措施
隨著(zhù)臨床輸血技術(shù)的快速發(fā)展，血型鑒定和交叉配血方法不斷的更新和完善，很好的保證了病人的輸血安全。但在一些基層醫院由于信息溝通不夠，技術(shù)還很原始，血型鑒定和交叉配血方法仍停留在鹽水法。由于鹽水配血法只能檢測出不相合的完全抗體，因此除鹽水法外，還需要應用其它的配血方法來(lái)檢測是否存在不完成抗體，以避免不完全抗體造成的輸血反應。由于傳統抗人球蛋白法、酶法本身的局限以及微柱凝膠法儀器昂貴、試劑成本高，目前大多數的基層醫院，在未能常規開(kāi)展紅細胞不完全抗體篩查情況下，只能采用鹽水法加凝聚胺配血法來(lái)進(jìn)行輸血前配血試驗。
段慧玲等[14]報道，幾種交叉配血方法的靈敏度依次為：微柱凝膠法>凝聚胺法>鹽水法。目前，國外基本采用微柱凝膠法，國內也正在普及。何子毅[15]、羅志[16]的研究表明，微柱凝膠法、抗人球蛋白法和凝聚胺法用于交叉配血檢測IgG型抗體，如果超出其最低檢測限，均存在陽(yáng)性漏檢的現象。因此我們建議在日常交叉配血工作中，采用多種方法同時(shí)做交叉配血試驗，以防止供受血者血液中存在的效價(jià)較低、或效價(jià)較低、親合力也較低的IgG抗體漏檢。此外，有些交叉配血試驗，由于受到過(guò)高量的球蛋白的影響，試驗結果也可出現假陽(yáng)性，此時(shí)應對結果做進(jìn)一步鑒定，以確保交叉配血結果的準確性。
參考文獻
[1] 胡永紅,李勇.紅細胞血型應用/李勇,楊貴貞.人類(lèi)紅細胞血型學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗技術(shù)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1999.156.261
[2] 王培華,輸血技術(shù)學(xué)[M],第2版,北京:人民衛生出版社,2002:126-131
[3] 李延年,譚麗莉.由單純鹽水介質(zhì)配血的危害性[J]，臨床血液學(xué)雜志,1996，9(3): 137-137
[4] 趙修風(fēng),尤崇革.凝聚胺檢測技術(shù)在交叉配血中的應用[J].蘭州醫學(xué)院學(xué)報，2003,29(4):44-45
[5] 馬利平,張建國.凝聚胺試驗在交叉配血中的應用[J]，濟寧醫學(xué)院學(xué)報，2005,28(2)62
[6] 桑勝去,胡宗煌,徐正平等.手工凝聚胺技術(shù)在產(chǎn)前免疫性抗體及新生兒溶血病檢查中的應用[J],臨床檢驗雜志,1997,15(1):50-50
[7] 張俊玲,尚錦青,楊波等.3種配血方法對含RH抗體血樣本配血效果研究[J].中國輸血雜志,2008,21(1):12-14
[8] 薛莉,李鵬,侯振嬌.抗球蛋白法與凝聚胺法用于低效價(jià)抗-D標本配血的比較[J].中國輸血雜志,2009, 22(10):825-826
[9] 陳桂冰,張然,曾蘭英.凝聚胺法交叉配血的干擾及排除方法研究[J].當代醫學(xué),2011,17(29):42-43
[10]夏琳,周新.臨床輸血與輸血技術(shù)學(xué)實(shí)驗指導[M],北京:人民衛生出版社.2004:56-57
[11]Cate JC 4th, Reilly N.Evaluation and implementation of the gel test for indirect antiglobin testing in a community hospital laboratory. Arch Pathol lab Med, 1999, 123(8):693-697
[12]張紅梅. 微柱凝膠法與凝聚胺法交叉配血結果的比較[J],臨床輸血與檢驗,2011, 13(1): 66-67
[13]楊世明,田榆,張勇萍等.微柱凝膠法交叉配血試驗及其影響因素的探討[J],細胞與分子免疫學(xué)雜志,2007,23(8):780-781
[14]段慧玲,滕本秀,鄭月明.柱凝集技術(shù)Coombs試驗效果評價(jià)[J],免疫學(xué)雜志，2002,18(3):232-233
[15]何子毅,劉赴平,劉仁強等. 三種常用交叉配血方法檢出IGG型抗體能力的比較[J]. 中國生物制品學(xué)雜志,2009, 22(3):294-295
[16]羅志,李聚林,孔慶芳等.4種交叉配血方法的試驗效果比較[J],中國輸血雜志,2009, 22(1):36-37
【血型鑒定和交叉配血技術(shù)的進(jìn)展】相關(guān)文章：
醫學(xué)圖像配準技術(shù)及其研究進(jìn)展03-01
肺隔離技術(shù)進(jìn)展03-08
基于數據挖掘技術(shù)的交叉銷(xiāo)售分析12-08
分析電力配網(wǎng)管理技術(shù)的運行和維護的論文01-22
最新汽車(chē)維修技術(shù)的特征與進(jìn)展03-18
對工業(yè)煙氣脫硫技術(shù)的研究進(jìn)展03-21
雙目立體視覺(jué)技術(shù)的實(shí)現及其進(jìn)展03-18