達坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細菌的多樣性分析及鈉離子輸出相關(guān)基因的克
論文摘要: 嗜鹽菌由于具有廣泛的環(huán)境(略)系統發(fā)育多樣性、獨特的耐鹽機制和潛在應用價(jià)值,近年來(lái)受到科學(xué)界的廣泛關(guān)注.本研究以新疆達坂鹽湖沉積土壤為實(shí)驗材料,對新疆達坂鹽湖的嗜鹽細菌進(jìn)行多樣性分析,并從中克隆獲得1個(gè)新的鈉離子輸出相關(guān)基因.主要研究結論如下: 以選擇性富集培養獲得的嗜鹽細菌基因組DNA為模板,擴增16S rRNA基因,在此(略)鹽細菌的16S rRNA基因文庫,隨機挑選文庫中的100個(gè)陽(yáng)性克隆子進(jìn)行群落結構多樣性分析.16S rRNA基因序列分析結果表明:100個(gè)克隆分屬于細菌域9個(gè)屬的27個(gè)種,其中芽(略)cillus)為優(yōu)勢菌群(48%),喜鹽芽孢桿菌(Halobacillus) (14%)、嗜鹽單胞菌(Halomonas) (13%)為次優(yōu)勢菌群.分析的陽(yáng)性克隆子中(略)子與GenBank中已報道16S rRNA基因序列的相似性在88.80%到96.90%之間,可能代表新屬或新種.研究結果表明,新疆達坂鹽湖沉積土壤的富集培養物中存在種類(lèi)較為豐富的嗜鹽細菌. 以大腸桿菌Na+/H+逆向轉運蛋白基因缺陷株Escheric(略)li KNabc為宿主,...
Halophiles living in high-salt environment, due to a wide diversity of environmental(omitted)n, phylogenetic diversity, uniqu(omitted)erance mechanisms and potential applica-tions in recent years widespread attention by the scientific community. In this study, Daban(omitted) in Xinjiang as materials deposited s(omitted)er to obtain directional halophilic microorganisms enriched total DNA as a template of the Daban salt(omitted)injiang diversity of halophilic bacteria, and a new sodium ion output ...
目錄:摘要 第4-5頁(yè)
Abstract 第5頁(yè)
目錄 第6-9頁(yè)
1 序言 第9-26頁(yè)
·極端微生物簡(jiǎn)介 第9-11頁(yè)
·極端微生物的主要生物類(lèi)群 第9-10頁(yè)
·嗜熱微生物和嗜冷微生物 第9頁(yè)
·嗜酸微生物和嗜堿微生物 第9-10頁(yè)
·嗜鹽微生物 第10頁(yè)
·嗜壓微生物 第10頁(yè)
·極端微生物的應用 第10-11頁(yè)
·嗜鹽菌的研究概況 第11-16頁(yè)
·嗜鹽菌的定義和分類(lèi) 第11-12頁(yè)
·嗜鹽菌棲息的鹽域環(huán)境 第12頁(yè)
·嗜鹽古菌的研究歷史 第12頁(yè)
·中度嗜鹽菌的研究歷史 第12-13頁(yè)
·嗜鹽菌的研究熱點(diǎn) 第13-16頁(yè)
·嗜鹽菌的分類(lèi)學(xué) 第13頁(yè)
·嗜鹽菌的系統發(fā)育多樣性 第13-14頁(yè)
·嗜鹽菌的應用 第14-16頁(yè)
·嗜鹽菌的生理學(xué) 第16頁(yè)
·嗜鹽微生物的鹽適應機制 第16-23頁(yè)
·通過(guò)提高胞質(zhì)緩沖力來(lái)適應高鹽環(huán)境 第17頁(yè)
·次級鈉泵系統 第17-23頁(yè)
·大腸桿菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第17-20頁(yè)
·耐鹽菌和嗜鹽菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第20-21頁(yè)
·嗜堿菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第21頁(yè)
·其它類(lèi)型微生物中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第21-22頁(yè)
·NhaD Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第22-23頁(yè)
·Na~+/H~+逆向轉運蛋白的應用前景 第23頁(yè)
·微生物Na~+/H~+逆向轉運蛋白亟待研究的問(wèn)題 第23-24頁(yè)
·本研究的指導思想、目的和意義 第24頁(yè)
·本研究的技術(shù)路線(xiàn) 第24-26頁(yè)
2 新疆達坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細菌的多樣性分析 第26-37頁(yè)
·材料和方法 第26-31頁(yè)
·樣品的采集和處理 第26頁(yè)
·主要儀器和實(shí)驗用品 第26頁(yè)
·菌株和載體 第26頁(yè)
·培養基 第26-27頁(yè)
·主要試劑 第27頁(yè)
·DNA提取試劑 第27頁(yè)
·電泳相關(guān)緩沖液 第27頁(yè)
·實(shí)驗方法 第27-31頁(yè)
·嗜鹽菌的定向富集 第27-28頁(yè)
·總基因組DNA的提取與純化 第28頁(yè)
·DNA濃度和純度的測定 第28頁(yè)
·PCR反應體系和條件 第28-29頁(yè)
·PCR產(chǎn)物的純化 第29頁(yè)
·連接 第29-30頁(yè)
·熱激感受態(tài)的制備 第30頁(yè)
·熱激轉化 第30頁(yè)
·菌落PCR 第30頁(yè)
·DNA序列測定 第30頁(yè)
·S rRNA的系統發(fā)育分析 第30-31頁(yè)
·核苷酸序列登錄號 第31頁(yè)
·結果與分析 第31-36頁(yè)
·總基因組DNA的提取 第31頁(yè)
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因多樣性及其系統發(fā)育分析 第31-36頁(yè)
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因系列擴增 第31-32頁(yè)
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因克隆文庫的構建與多樣性分析 第32-36頁(yè)
·討論 第36-37頁(yè)
3 微生物鈉離子輸出相關(guān)基因的克隆與功能研究 第37-55頁(yè)
·材料與方法 第37-43頁(yè)
·樣品的采集和處理 第37頁(yè)
·菌株、質(zhì)粒和引物 第37-38頁(yè)
·主要儀器和實(shí)驗用品 第38頁(yè)
·培養基 第38頁(yè)
·堿法提取質(zhì)粒所需主要試劑 第38頁(yè)
·實(shí)驗方法 第38-43頁(yè)
·總基因組DNA提取、純化及濃度測定 第38頁(yè)
·總基因組DNA的部分酶切 第38-39頁(yè)
·載體的酶切和去磷酸化 第39頁(yè)
·載體與總基因組DNA部分酶切片段的連接 第39-40頁(yè)
·連接產(chǎn)物純化 第40頁(yè)
·電轉化感受態(tài)細胞的制備 第40-41頁(yè)
·電激轉化 第41頁(yè)
·質(zhì)粒的快速檢測 第41頁(yè)
·質(zhì)粒提取 第41-42頁(yè)
·鈉離子輸出相關(guān)基因的亞克隆 第42-43頁(yè)
·基因序列的生物信息學(xué)分析 第43頁(yè)
·重組子在不同條件下的生長(cháng)能力測試 第43頁(yè)
·結果和分析 第43-53頁(yè)
·總基因組DNA的部分酶切 第43-44頁(yè)
·陽(yáng)性克隆子的篩選 第44頁(yè)
·重組質(zhì)粒攜帶外源基因的序列分析 第44-51頁(yè)
·Na~+輸出相關(guān)基因的亞克隆 第51-52頁(yè)
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL的耐鹽性實(shí)驗 第52頁(yè)
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL對堿性pH的抗性 第52-53頁(yè)
·討論 第53-55頁(yè)
結論 第55-56頁(yè)
參考文獻 第56-65頁(yè)
縮略詞一覽表 第65-66頁(yè)
致謝 第66-67頁(yè)
項目資助與論文發(fā)表情況 第67頁(yè)
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