- 相關(guān)推薦
臨床醫學(xué)檢驗技士備考資料：溶血反應的檢測試劑
溶血反應的檢測試劑
(一)補體
檢測血清補體水平或補體活性時(shí)需要從受檢者采血及分離血清。做補體結合試驗時(shí)多采用豚鼠血清作為實(shí)驗用補體的來(lái)源。因為補體在體外極易衰變，所以檢測補體活性的血清標本和作為補體試劑的血清必須新鮮。
受檢者一般做靜脈采血，在動(dòng)物可做心臟采血。血清分離后應及時(shí)使用，最好在當日用完。必須保存時(shí)采用小量分裝的辦法，置-70℃下可保存數月，避免反復凍融。凍干制品可長(cháng)期保存，但其活性都不同程度地比新鮮血清降低。
以豚鼠血清作補體來(lái)源時(shí)，應考慮到個(gè)體差異。為了確保血清中補體的有效活性，必須取3只以上豚鼠的血清混合后使用。
(二)綿羊紅細胞
從綿羊頸靜脈無(wú)菌采血，抽出血液后立即小心地注入放有玻璃珠的無(wú)菌干燥三角燒瓶中，充分旋搖15～20min，以除去纖維蛋白。也可將羊血與等量或2倍量的Alsever血液保存液混合，既有抗凝作用，又適于儲存;分裝后置4℃，可使用3周。
實(shí)驗前，取適量抗凝血，加入8～10倍的生理鹽水，輕輕混勻后2000r/min離心5min;棄上清，沉淀的紅細胞用生理鹽水再洗一次，這時(shí)上清為無(wú)色澄清，如顯紅色說(shuō)明有溶血現象，應更換新鮮羊血;第三次用緩沖液洗滌，棄上清，取壓積紅細胞用緩沖液配制SRBC懸液，使用濃度一般為2%～5%。為使紅細胞濃度標準化，可吸取少量紅細胞懸液，中入20～30倍的稀釋液中，在542nm波長(cháng)比濁，以吸光度為標準調整紅細胞濃度。
(三)溶血素
溶血素即抗綿羊紅細胞抗體，多是以綿羊紅細胞免疫家兔而得到兔抗血清。一般沒(méi)有必要進(jìn)一步提純抗體，但在試驗前需先進(jìn)行加熱56℃30min或60℃3min以滅活補體。
由于補體溶血試驗及補體結合試驗均是比較精密的試驗，其結果與溶血素的效價(jià)有關(guān)，所以試驗需要滴定溶血素效價(jià);在制備抗血清的過(guò)程中，于動(dòng)物采血前和分離抗血清后也需要滴定溶血素效價(jià)。
1.溶血素稀釋稀釋溶血素時(shí)，要先對效價(jià)有個(gè)大概的估計，以便確定稀釋度的范圍。動(dòng)物采血前滴定時(shí)稀釋范圍要稍大些，實(shí)驗前的滴定便以原先的記錄作為參考(溶血素的效價(jià)多在數千單位以上)。溶血素稀釋一般不采用連續倍比稀釋法，因為稀釋到最后時(shí)跨度太大，不容易確定單位。為了便于操作，現舉例按表14-1配制不同稀釋度的溶血素。
2.效價(jià)滴定將稀釋好的溶血素及其他試劑按表14-2所示逐步加入到各試管中，放置37℃水浴，不要蓋上水浴箱的蓋子，以免蓋子上冷凝的水蒸氣滴入試管內引起非補體性溶血。30min后取出觀(guān)察結果。
溫育反應后，完全溶血的試管內液體紅色透明，放置一段時(shí)間后管底無(wú)細胞沉淀，離心后可見(jiàn)少許細胞碎渣。不溶血的管內液體渾濁;放置后可見(jiàn)紅細胞沉淀，上清無(wú)色透明。不同程度的不完全溶血介于兩者的中間變化態(tài)。
按照以上標準，以產(chǎn)生完全溶血的最高稀釋管為最大有效反應管，以該管的溶血素稀釋倍數為溶血素產(chǎn)效價(jià)。例如表14-2中的溶血素效價(jià)應為1:4000;在1:4000稀釋的情況下，反應液中所含溶血素的的量為1U/ml。
做補體活性測定或補體結合試驗時(shí)，一般使用2U/ml溶血素(在本例做1:2000稀釋)，與SRBC懸液等體積混合。
(四)稀釋緩沖液
磷酸緩沖液或巴比妥緩沖液等均可用于溶血試驗，pH值應調至7.2～7.4之間。另加入適量氯化鈉以保持等滲，并適當地加入一些鈣離子和鎂離子，這是補體活化所不可缺少的。有的配方還加入0.1%的明膠以使蛋白溶液穩定;加入0.01%NaN3可以防腐，利于較長(cháng)時(shí)間保存。
【臨床醫學(xué)檢驗技士備考資料：溶血反應的檢測試劑】相關(guān)文章：
臨床醫學(xué)檢驗技士備考資料：尿標本采集的常見(jiàn)種類(lèi)03-20
臨床醫學(xué)檢驗技士備考資料：血型鑒定操作注意事項03-20
2017臨床醫學(xué)檢驗技士考試強化備考題及答案02-27
2017臨床醫學(xué)檢驗技士考試備考試題及答案02-27
臨床醫學(xué)檢驗技士考試習題及答案02-27