鏈球菌屬及其檢驗

　　鏈球菌屬(Streptococcus)細菌，呈鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌，個(gè)別種成雙排列。以下是小編整理的鏈球菌屬及其檢驗，希望對大家有所幫助。

　　1、分類(lèi)

　　鏈球菌的分類(lèi)方法尚未統一。常用下列兩種方法。

　�、鸥鶕�溶血現象：分為3類(lèi)。

　�、偌仔腿苎�性鏈球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周?chē)��?～2mm寬的草綠色溶血環(huán)，稱(chēng)甲型溶血或α溶血，該類(lèi)菌又稱(chēng)草綠色鏈球菌，為條件致病菌。

　�、谝倚腿苎�性鏈球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周?chē)��?～4mm寬的透明溶血環(huán)，稱(chēng)乙型溶血或β溶血，該類(lèi)菌又稱(chēng)溶血性鏈球菌，致病性強，常引起人和動(dòng)物多種疾病。

　�、郾�型鏈球菌(γ-streptococcus)：菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)，因而又稱(chēng)不溶血性鏈球菌，一般不致病。

　�、聘鶕�抗原結構：按鏈球菌細胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20個(gè)群。同群鏈球菌間，因表面蛋白質(zhì)抗原不同又分若干型。如A群根據其M抗原不同，可分成約100個(gè)型;B群分4個(gè)型。對人致病的鏈球菌菌株，主要是 A群，多數呈現乙型溶血。

　　2、細菌特性

　�、沛溓蚓�

　�、� 形態(tài)染色 球形或橢圓形，直徑0.5～1.0μm，鏈狀排列，鏈的長(cháng)短與細菌的種類(lèi)和生長(cháng)環(huán)境有關(guān)，在液體培養基中形成的鏈較長(cháng)。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。多數菌株在培養早期(2～4h)形成透明質(zhì)酸的莢膜。革蘭染色陽(yáng)性。

　�、诜蛛x培養 營(yíng)養要求較高，培養基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、維生素等物質(zhì)。多數菌株兼性厭氧，少數為專(zhuān)性厭氧。在液體培養基中呈沉淀生長(cháng)，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圓形、凸起、光滑、直徑為0.5mm～0.75mm的細小菌落，菌落周?chē)�出現不同類(lèi)型的溶血環(huán)。

　�、凵�化反應 觸酶陰性、一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩特性可用來(lái)鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。

　�、芸乖瓨嬙� 主要有三種：

　　蛋白質(zhì)抗原：或稱(chēng)表面抗原。具型特異性有M、T、R、S 4種，位于C抗原外層。與致病性有關(guān)的是M抗原。

　　多糖抗原：或稱(chēng)C抗原。為群特異性抗原，位于細胞壁。根據C抗原的不同，將鏈球菌分為20群。對人致病的90%屬A群。

　　核蛋白抗原：或稱(chēng)P抗原。無(wú)特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。

　�、莸挚沽� 不強，60℃30min即被殺死。對常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環(huán)素及磺胺類(lèi)敏感。

　�、� 肺炎鏈球菌

　�、� 形態(tài)染色 革蘭陽(yáng)性球菌，菌體呈矛頭狀、成雙排列，寬端相對，尖端向外，在膿液、痰液及肺組織病變中亦可呈短鏈狀，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，在機體內或含血清的培養基中可形成莢膜。

　�、诜蛛x培養 營(yíng)養要求高，在血平板上形成灰白色、圓形、直徑為0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周?chē)�有草綠色溶血環(huán)。培養時(shí)間長(cháng)時(shí)可產(chǎn)生自溶酶。

　�、凵�化反應 多數菌株分解菊糖，膽鹽溶解試驗陽(yáng)性和optochin敏感試驗陽(yáng)性，籍此可與草綠色鏈球菌相區別。

　�、芸乖�結構

　　莢膜多糖抗原 可將肺炎鏈球菌分為85個(gè)血清型。肺炎鏈球菌14型與人類(lèi)A血型抗原有交叉反應。

　　多糖抗原 為各型菌株所共有�？杀谎�清中一種C反應蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎癥者含量增高，故常以測定CRP作為診斷的依據。

　　M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類(lèi)似，但抗原性不同，與毒力無(wú)關(guān)。

　�、莸挚沽� 本菌抵抗力弱，對一般消毒劑敏感。有莢膜菌株抗干燥力較強，在干痰中可存活1～2月。對青霉素、紅霉素、潔霉素敏感。

　�、� 變異性 有莢膜的肺炎鏈球菌經(jīng)人工培養后可發(fā)生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R變異，同時(shí)隨著(zhù)莢膜的消失，毒力亦隨之減弱。將R型菌落的菌株接種動(dòng)物或在血清肉湯中培養，則又可恢復S型。

　　3、臨床意義

　�、呕�膿性鏈球菌

　　A群鏈球菌也稱(chēng)化膿性鏈球菌(pyogenic streptococcus)，致病力強，占人類(lèi)鏈球菌感染的90%，能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶，如鏈球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內膜炎、腦膜炎及變態(tài)反應性疾病如急性腎小球腎炎、風(fēng)濕熱等，產(chǎn)毒株還可引起猩紅熱。鏈球菌型別多，各型間無(wú)交叉免疫，故常反復感染。

　�、迫殒溓蚓�

　　B群鏈球菌學(xué)名無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)是新生兒敗血癥和腦膜炎的常見(jiàn)菌，對成人主要引起腎盂腎炎、子宮內膜炎等。

　�、� 肺炎鏈球菌

　　肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)，俗稱(chēng)肺炎球菌(pneumococcus)，是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌，還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎等。其莢膜在細菌的侵襲力上有重要作用，此外溶血素、神經(jīng)氨酸酶是主要致病物質(zhì)。感染后機體可產(chǎn)生牢固的型特異性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。

　�、� 草綠色鏈球菌

　　草綠色鏈球菌亦稱(chēng)甲型溶血性鏈球菌。是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亞急性細菌性心內膜炎。

　　4、微生物學(xué)檢驗

　�、艠吮静杉� 根據不同疾病采集不同標本。

　�、茩z驗方法

　　顯微鏡檢查 標本涂片革蘭染色，鏡檢見(jiàn)鏈狀排列革蘭陽(yáng)性球菌可初報。

　　分離培養 血液標本先增菌培養，膿液、咽拭可接種血瓊脂平板并涂片染色鏡檢，初代分離需5%C02，35℃24h觀(guān)察菌落性狀。

　�、品窝祖溓蚓�

　�、贆z驗程序

　�、跇吮静杉� 根據病變部位采集不同標本。

　�、蹤z驗方法

　　顯微鏡檢查： 除血液外，痰、膿液等均可直接涂片染色鏡檢。如發(fā)現革蘭陽(yáng)性矛頭狀雙球菌，周?chē)�有較寬的透明區，經(jīng)莢膜染色確認后可初報“找到肺炎鏈球菌”。

　　分離培養：血液、腦脊液先增菌，可呈均勻混濁，有綠色熒光。痰液、膿液可直接接種血平板，5%～10%CO2培養后，取可疑菌落進(jìn)一步作optochin敏感實(shí)驗、膽鹽溶菌試驗與菊糖發(fā)酵試驗，以區別于甲型鏈球菌。

　　動(dòng)物試驗：小鼠對肺炎鏈球菌敏感，12～36h死亡。

　　莢膜腫脹試驗：如遇同型免疫血清，則肺炎鏈球菌莢膜出現腫脹，為陽(yáng)性。

　�、荑b定與鑒別

　�、貺ancefield群特異性抗原鑒定：B群為無(wú)乳鏈球菌，F群為米勒鏈球菌，A、C、G群抗原不是種特異性抗原，還需根據菌落大小和生化反應進(jìn)一步鑒定。

　�、赑YR試驗：化膿性鏈球菌為陽(yáng)性。

　�、蹢U菌肽(bacitracin)敏感試驗：化膿性鏈球菌為陽(yáng)性，有別于其他PYR陽(yáng)性的β溶血性細菌(豬鏈球菌、海豚鏈球菌)和A群小菌落β溶血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。此法可作為篩選試驗。

　�、躒P試驗：可鑒別A、C、G群β溶血的大、小兩種不同菌落。

　�、軨AMP試驗：無(wú)乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，它可促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產(chǎn)生顯著(zhù)的協(xié)同溶血作用。試驗時(shí)先將金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直徑劃線(xiàn)接種，再沿該線(xiàn)垂直方向接種無(wú)乳鏈球菌，兩線(xiàn)不得相接，間隔約3～4mm。35℃孵育過(guò)夜，兩種劃線(xiàn)交界處出現箭頭狀溶血，即為陽(yáng)性反應。本法可作為無(wú)乳鏈球菌的初步鑒定試驗。

　　性狀

　　形態(tài)與染色

　　革蘭染色陽(yáng)性，菌體呈球形或卵圓形，直徑0.6~1. 0μm，呈鏈狀排列。臨床標本及固體培養基中以短鏈或成對多見(jiàn)，液體培養基中呈長(cháng)鏈。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，但有菌毛樣結構，多數菌株在培養早期可形成莢膜，隨著(zhù)培養時(shí)間的延長(cháng)而消失。衰老、死亡或被吞噬細胞吞噬后革蘭染色可呈陰性。

　　培養特性與生化反應

　　需氧或兼性厭氧。營(yíng)養要求較高，在含血液、血清、葡萄糖的培養基中才能生長(cháng)。最適生長(cháng)溫度為35℃，最適pH為7.4~7.6。在血清肉湯中易成長(cháng)鏈，管底呈絮狀沉淀。在血瓊脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、邊緣整齊、直徑0.5~0. 75 mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血現象。

　　鏈球菌不產(chǎn)生觸酶，可與葡萄球菌相區別。鏈球菌不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩個(gè)特性常被用來(lái)鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。

　　抗原構造

　　鏈球菌的抗原構造復雜，主要有3種：

　�、俸说鞍卓乖�（又稱(chēng)P抗原）：無(wú)種特異性，各種鏈球菌均相同，可與葡萄球菌有交叉反應。

　�、诙嗵强乖�（又稱(chēng)C抗原）：是細胞壁的多糖成分，有群特異性，是鏈球菌分群的依據。

　�、鄣鞍踪|(zhì)抗原（又稱(chēng)表面抗原）：細胞壁外的菌毛樣結構含M蛋白，位于C抗原外層，具有型特異性。M蛋白是化膿性鏈球菌的一種重要毒力因子，具有抗吞噬作用并與致病性有關(guān)。

　　抵抗力

　　鏈球菌抵抗力不強，60℃ 30分鐘即被殺死，在干燥塵埃中可生存數月，對一般消毒劑敏感。乙型溶血性鏈球菌對青霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽及磺胺類(lèi)藥物等敏感。

　　致病性

　　A群鏈球菌

　　A群鏈球菌也稱(chēng)為化膿性鏈球菌，是人類(lèi)鏈球菌感染最常見(jiàn)病原菌之一。

　　1．致病物質(zhì)A群鏈球菌有較強的侵襲力，除胞壁成分外，可產(chǎn)生多種外毒素和胞外酶。

　　(1)M蛋白 是A群鏈球菌的主要致病因子，含M蛋白鏈球菌具有抗吞噬和抵抗吞噬細胞內殺菌作用的能力。此外，M蛋白與心肌、腎小球基底膜有共同抗原，能刺激機體產(chǎn)生相應抗體，引起交叉反應，損害人類(lèi)心血管等組織。在某些條件下，M蛋白與相應抗體形成的免疫復合物可引起急性腎小球腎炎等超敏反應。

　　(2)鏈球菌溶血素由乙型溶血性鏈球菌產(chǎn)生，有兩種類(lèi)型：

　�、冁溓蚓�溶血素O(Streptolysin O，SLO)：是一種含- SH基的蛋白質(zhì)，對氧敏感，遇氧時(shí)- SH被氧化成- ss -基，失去溶血活性，若加入還原劑即可恢復溶血作用。SLO免疫原性強，鏈球菌感染后2-3周至病愈后數月到一年內，85%~90%的患者血液中可出現抗SLO的抗體，風(fēng)濕熱尤其是活動(dòng)期患者該抗體顯著(zhù)升高，其效價(jià)在1：400以上，可作為鏈球菌新近感染的重要參考指標。

　�、阪溓蚓�溶血素S( streptolysin S，SLS)：鏈球菌在血瓊脂平板上菌落周?chē)�的B溶血環(huán)即SLS所致。SLS是小分子糖肽，無(wú)免疫原性，對氧不敏感。SLS對白細胞和多種組織細胞有破壞作用。

　　(3)致熱外毒素(pyrogenic exotoxin) 又稱(chēng)紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類(lèi)猩紅熱的主要毒性物質(zhì)，致熱外毒素抗原性強，具有超抗原作用，對兔有致熱性和致死性。

　　(4)侵襲性酶類(lèi) A群鏈球菌可產(chǎn)生多種侵襲性酶，均是擴散因子，主要有三種。

　�、偻该髻|(zhì)酸酶(hyaluromidase)：能分解細胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，使細菌易在組織中擴散。

　�、阪溂っ福�( strepto - kinase，SK)：又稱(chēng)鏈球菌纖維蛋白溶酶，與葡激酶相似，能使血漿中的纖維蛋白酶原轉化成纖維蛋白酶，可溶解血塊或阻止血漿凝固，有利于細菌在組織中擴散。③鏈道酶( streptodomase，SD)：又稱(chēng)鏈球菌DNA酶。主要由A、C、G群鏈球菌產(chǎn)生。能分解膿液中高度黏稠的DNA，使膿液稀薄，促進(jìn)細菌擴散。

　　2．所致疾病鏈球菌可引起人類(lèi)多種疾患。A群鏈球菌引起的疾病約占人類(lèi)鏈球菌感染 的90%。感染來(lái)源是患者和帶菌者。感染方式途徑可通過(guò)空氣飛沫傳播，亦可經(jīng)皮膚傷口感染。

　　(1)化膿性炎癥主要有淋巴管炎、淋巴結炎、蜂窩織炎、癰、膿皰瘡等局部皮膚和皮下組織感染，還可引起扁桃體炎、咽炎、咽峽炎、鼻竇炎、產(chǎn)褥感染、中耳炎、乳突炎等及其他系統的感染。

　　(2)超敏反應性疾病主要有急性腎小球腎炎和風(fēng)濕熱等。

　　(3)中毒性疾病鏈球菌毒素休克綜合征、猩紅熱等。

　　3．免疫性A群鏈球菌感染后，機體產(chǎn)生多種抗體，同型鏈球菌可使機體獲得特異性免疫力。鏈球菌型別較多，各型之間無(wú)交叉免疫力，所以機體可反復感染�；夹杉t熱后可產(chǎn)生同型的致熱外毒素抗體，能建立牢固的同型抗毒素免疫。

　　肺炎鏈球菌

　　肺炎鏈球菌屬鏈球菌屬。廣泛分布于自然界，經(jīng)常寄居于正常人的鼻咽腔中，多數不致病，少數引起大葉性肺炎等疾病。

　　1．抗原結構與分型

　�、偾v膜多糖抗原：存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據抗原不同，肺炎鏈球菌可分為90多個(gè)血清型，其中有20多個(gè)血清型可引起疾病。

　�、贑多糖抗原：存在于肺炎鏈球菌細胞壁中，在鈣離子存在時(shí)，可與血清中一種C反應蛋白(Creartion protein，CRP)結合，故常用肺炎鏈球菌C多糖來(lái)測定C反應蛋白，輔助診斷活動(dòng)性風(fēng)濕熱及急性炎癥性疾病。

　　2．致病物質(zhì)本菌的致病物質(zhì)主要是莢膜莢膜有抗吞噬作用，失去莢膜，細菌就失去致病力。此外，肺炎鏈球菌溶血素O、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶是肺炎鏈球菌較重要的致病物質(zhì)。

　　3．所致疾病該菌寄生在正常人的口腔及鼻咽腔，一般不致病，當機體免疫力下降時(shí)才致病。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎，其次是支氣管炎肺炎后可繼發(fā)膿胸、胸膜炎，也可引起乳突炎、中耳炎、敗血癥和腦膜炎等。

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