- 相關(guān)推薦
食品衛生檢驗中沙門(mén)菌屬LAMP檢測方法的應用效果分析
Loop-mediated isothermal amplification 縮寫(xiě)為L(cháng)AMP， 環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一門(mén)新興的基因擴增技術(shù),作為一種分子生物學(xué)檢測技術(shù),具有高特異性、高敏感性、簡(jiǎn)單、便捷及成本低的特點(diǎn),已廣泛用于臨床疾病的診斷、流行性細菌或病毒的定性定量檢測、動(dòng)物胚胎性別鑒定及基因芯片開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。
摘要：目的：分析沙門(mén)菌屬LAMP在食品衛生檢驗中的應用效果。方法：擇取2015年2月-11月的食品標本142份，通過(guò)LAMP以及分離培養法對其進(jìn)行檢測與鑒定，對比兩組檢測結果。結果：通過(guò)LAMP檢測所得結果中，陽(yáng)性率顯著(zhù)優(yōu)于分類(lèi)培養鑒定結果，數據差異存在統計學(xué)意義(P<0、05);應用LAMP進(jìn)行檢驗，可以通過(guò)加熒光染料染色法判斷結果;LAMP檢測時(shí)間不超過(guò)24h，而分離培養鑒定時(shí)間在4d-7d左右。結論：應用LAMP法對食品進(jìn)行檢測，不僅具有較高的沙門(mén)菌屬陽(yáng)性率，而且檢測周期較短，實(shí)際應用價(jià)值顯著(zhù)，值得廣泛推廣。
關(guān)鍵詞：食品衛生檢驗 LAMP檢測方法 應用效果 沙門(mén)菌屬
沙門(mén)菌是誘發(fā)人體種類(lèi)細菌性食物中毒的主要因素�，F階段，檢測沙門(mén)菌的主要方法為分類(lèi)培養法，該方法雖然具有較好的準確性，但操作程序十分繁瑣，免疫學(xué)法并不具較好的敏感度，而PCR雖然具有較高的敏感度以及特異度，但在設備方面具有較高的要求，推廣限制較大。LAMP屬于新興核酸擴增法，具有特異性強、快速以及簡(jiǎn)單等優(yōu)勢。本次試驗主要通過(guò)對比分析分類(lèi)培養法與LAMP法在食品沙門(mén)菌屬方面的檢測效果，進(jìn)而探析LAMP法的應用價(jià)值。
一、資料與方法
1、一般資料
擇取2015年2月-11月的食品標本142份，其中，有6分生食類(lèi)蔬菜、8份鮮榨果汁、8份沙拉、10份冰激凌、10份生水產(chǎn)品、20份速凍米面、20份非發(fā)酵豆制品、20份熟肉、20份生鮮肉以及20份冷凍生肉。以腸炎沙門(mén)菌為參考菌株。
2、檢測方法
取25g食品標本置于無(wú)菌均質(zhì)袋內，以拍擊式均質(zhì)器進(jìn)行拍打，2min后停止，將其置于37℃環(huán)境中培養10h，冷凍食品置于45℃環(huán)境中解凍15min。
對標本行分離培養法檢測：在10mlTTB增菌液中接種1ml增菌后標本，然后置于42℃中對其進(jìn)行培養，時(shí)長(cháng)為24h。另在101mlSC增菌液中接種1ml增菌后標本，在37℃環(huán)境中培養4h。各取1杯增菌液，分別進(jìn)行XLD平板與BS平板接種，于37℃環(huán)境中培養24h。擇取3個(gè)可疑菌落，進(jìn)行賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基、營(yíng)養瓊脂平板以及TSI接種，于37℃環(huán)境中培養24h。如果生化反應與沙門(mén)菌特征相符，取出營(yíng)養瓊脂平板中的可疑菌落，通過(guò)生理鹽水，配制為菌懸液，然后通過(guò)微生物鑒定系統進(jìn)行分析。如果XLD平板、BS平板中不存在可疑菌落，繼續將BS平板置于37℃環(huán)境中培養24h，如檢測仍不存在可疑菌落，則為陰性。
對標本進(jìn)行LAMP檢測：取1ml標本前增菌液，對其進(jìn)行離心處理，離心率為每分鐘10000r，共2min，排除上清提取核酸;另取上清液1l，制成DNA待檢模板，對食品標本進(jìn)行DNA檢測，反應后，通過(guò)肉眼觀(guān)察反應液顏色，如果呈現綠色，則為陽(yáng)性;如果呈棕色，或是無(wú)色，則為陰性。
3、觀(guān)察指標
觀(guān)察兩種檢測方法的陽(yáng)性率。
4、統計學(xué)方法
本次實(shí)驗過(guò)程中，以SPSS19、0統計學(xué)軟件對兩種檢測方法所涉及數據進(jìn)行分析。其中計數的資料用n(%)表示，數據的組間比較以χ2進(jìn)行檢驗;計量資料用均數±標準差(χ±s)表示，數據的組間比較以T進(jìn)行檢驗，P<0、05為統計學(xué)差異顯著(zhù)的判定標準。
二、結果
LAMP檢測方法的陽(yáng)性率為11、27%，分離培養法的陽(yáng)性率為4、23%，數據組間比較差異明顯，即P<0、05，詳情見(jiàn)表1：
三、討論
由各種類(lèi)型沙門(mén)菌引發(fā)不同形式的野生禽獸、家畜以及人體感染，被統稱(chēng)為沙門(mén)菌病。帶菌者，或是感染沙門(mén)菌人的糞便會(huì )在一定程度上污染食物，導致人體食物中毒。沙門(mén)菌極易導致人體發(fā)生細菌性食物中毒，主要表現有敗血癥、腸胃炎以及腸傷寒等，而且具有一定的傳染性，可以通過(guò)消化道致病。LAMP檢測法是新興恒溫核酸擴增法，根據靶基因所具有的6個(gè)區域，設計出來(lái)4種特異引物，通過(guò)特定鏈對DNA聚合酶進(jìn)行置換處理，然后將其置于恒溫條件下45min左右，促使其產(chǎn)生擴增反應。相對比PCR而言，LAMP在模板方面并不存在紫外觀(guān)察、電泳、溫度循環(huán)以及熱變性等要求，不僅簡(jiǎn)單快捷，具有非常強的特異性，而且檢測范圍相對較大，檢測靈敏度較好，在實(shí)際應用過(guò)程中，不需要借助特定儀器設備，便可以實(shí)現現場(chǎng)快捷且高通量檢測，成本較低，經(jīng)濟性能顯著(zhù)。
細菌分離培養法操作程序較為復雜，檢測速度比較緩慢，基本上，需要檢測7d后，才能獲取陽(yáng)性結果，而且分離細菌后，還要UI器進(jìn)行增菌與再分離培養，生化鑒定過(guò)程中繁瑣，且成本較高，難以實(shí)現普及。LAMP可以直接提取前增菌液內的核酸，60min中便可以完成對其的擴增操作，沙門(mén)菌屬檢出時(shí)間不會(huì )超過(guò)24h，效率非常高。不僅如此，應用該方法可以通過(guò)肉眼直接觀(guān)察檢測結果，具有非常顯著(zhù)的直觀(guān)價(jià)值與便捷性。
通過(guò)本次實(shí)驗可知，LAMP檢測法與分離培養法檢測結果的陽(yáng)性率差異非常顯著(zhù)，LAMP檢測陽(yáng)性率為11、27%，分離培養法檢測的陽(yáng)性率為4、23%，數據比較P<0、05，統計學(xué)意義顯著(zhù)。
四、結語(yǔ)
應用LAMP法對食品進(jìn)行檢測，不僅具有較高的沙門(mén)菌屬陽(yáng)性率，而且檢測周期較短，實(shí)際應用價(jià)值顯著(zhù)，值得廣泛推廣。
【食品衛生檢驗中沙門(mén)菌屬LAMP檢測方法的應用效果分析】相關(guān)文章：
質(zhì)量管理系統在特種設備檢驗檢測中的應用及分析11-27
市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)研究中對應分析方法的應用03-23
稀土在電鍍中的應用分析03-18
本量利分析方法在高校成本核算中的應用12-06
MCMC算法在MIMO系統檢測中的應用03-07
循證護理理論在胃腸鏡室護生實(shí)習中的應用及效果分析03-05
論聚類(lèi)分析在市場(chǎng)分析中的應用03-19