淺析不同針刺量對大鼠腦缺血后突觸可塑性的影響

摘要： 【目的】觀(guān)察不同針刺量對腦缺血后海馬齒狀回（DG）突觸可塑性的影響�！痉椒ā窟x用Wistar 大鼠36只，隨機分為假手術(shù)組、缺血模型組、治療1組（每日針刺1次）、治療2組（每日針刺2次），采用熱凝閉大鼠大腦中動(dòng)脈法復制局灶性腦缺血模型，治療1、2組給予電針百會(huì )、大椎穴治療。觀(guān)察不同針刺次數對腦缺血后DG區突觸可塑性的影響�！窘Y果】與假手術(shù)組比較缺血模型組興奮性突觸后電位（EPSP）、群峰電位（PS）的輸入/輸出曲線(xiàn)（I/O曲線(xiàn)）幅度顯著(zhù)降低（P＜0?05）；與缺血模型組比較治療1組EPSP、 PS的I/O曲線(xiàn)顯著(zhù)升高（P ＜0?01或P＜0?05）, 與假手術(shù)組比較無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）。與缺血模型組比較治療2組EPSP、 PS的I/O曲線(xiàn)顯著(zhù)升高（P＜0?05），與假手術(shù)組比較EPSP的I/O曲線(xiàn)幅度降低（P＜0?05），而PS的幅度無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）；與治療1組比較治療2組EPSP的I/O曲線(xiàn)幅度降低（P＜0?05），PS的幅度無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）。EPSP的長(cháng)時(shí)程增強（LTP）幅度缺血模型組較假手術(shù)組顯著(zhù)升高（P＜0?05），兩個(gè)治療組較假手術(shù)組顯著(zhù)升高（P＜0?05），與缺血模型組比較及組間比較均無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）。PS的LTP幅度缺血模型組較假手術(shù)組顯著(zhù)降低 （P＜0?05），兩個(gè)治療組顯著(zhù)高于缺血模型組（P＜0?05），與假手術(shù)組比較及組間比較均無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）。EPSP的長(cháng)時(shí)程抑制（LTD）幅度缺血模型組較假手術(shù)組降低 （P＜0?05），兩個(gè)治療組EPSP的LTD幅度較假手術(shù)組顯著(zhù)降低 （P＜0?05），與缺血模型組比較及組間比較均無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）。缺血模型組PS的LTD幅度與假手術(shù)組比較無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05），治療1組PS的LTD幅度與假手術(shù)組比較顯著(zhù)升高（P＜0?05），與缺血模型組比較無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）；治療2組與其他3組比較均無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0?05）�！窘Y論】針刺對缺血引起的海馬DG區EPSP、PS的I/O曲線(xiàn)幅度變化起保護作用，能修復缺血造成的海馬DG區PS的LTP誘導的損害，而不同針刺量對改變腦缺血后海馬的LTP誘導方面的作用無(wú)顯著(zhù)性差異。

關(guān)鍵詞： 腦缺血/針灸療法；突觸可塑性；疾病模型，動(dòng)物；大鼠；穴，百會(huì )；穴，大椎

突觸是神經(jīng)元之間信息傳遞和加工的關(guān)鍵結構，在腦和脊髓中，整個(gè)神經(jīng)元表面積（包括胞體、樹(shù)突和軸突）有60%～80%的部位被突觸所占據。突觸可塑性一般即指突觸傳遞的可塑性，突觸可塑性是腦可塑性的主要表現，皮層聯(lián)絡(luò )纖維的突觸可塑性是皮層圖重建的基礎［1-3］。前期研究表明［4］針刺能阻止由永久性的大腦中動(dòng)脈閉塞缺血造成的缺血同側海馬DG區基本的突觸傳遞降低和單脈沖刺激海馬穿通纖維引起的齒狀回顆粒細胞的共同發(fā)放幅度的降低，消除缺血對海馬DG區突觸傳遞造成的損害；能明顯改善由永久性大腦中動(dòng)脈閉塞造成的海馬突觸傳導效率的損害。針刺是治療腦缺血疾病的有效方法之一，但對針刺治療腦缺血的時(shí)機選擇、治療間隔時(shí)間、留針時(shí)間、療程等尚存在爭議［5］。本研究觀(guān)察了不同針刺次數對腦缺血海馬突觸傳遞效率的影響，以探討針刺治療腦缺血的最佳參數�，F報道如下。
1材料和方法
1?1動(dòng)物健康雄性Wistar大鼠36只（由中國科技大學(xué)生命科學(xué)院動(dòng)物房提供，實(shí)驗動(dòng)物機構許可證號：D010203），體質(zhì)量210～290g，鼠齡8～10周。用普通顆粒型大鼠飼料（質(zhì)量分數為蛋白23%，脂肪4?7%，鈉鹽0?24%）喂養，飲用自來(lái)水。室溫18℃～26℃，濕度60%～80%，光暗周期12h。由抽簽法隨機分為假手術(shù)組﹑缺血模型組、治療1組和治療2組，每組9只。
1?2主要儀器電熱灼器（932型，上海醫療器械八廠(chǎng)）；30號1寸毫針（華佗牌，蘇州醫療用品廠(chǎng)）；電針儀（805?A Ⅱ 型，廣東汕頭市醫用設備廠(chǎng)）；立體定位儀（江灣 Ⅰ 型，上海第二軍醫大學(xué)）。
1?3模型復制采用熱凝閉大腦中動(dòng)脈法復制局灶性腦缺血模型［6］。以100mg/L水合氯醛溶液，按400mg/kg腹腔注射麻醉，然后取右上側臥位固定，沿耳—眼連續中點(diǎn)切開(kāi)皮膚，分離顳肌，暴露顳骨作一骨窗，輕抬腦，顯露大腦中動(dòng)脈，用燒紅的電熱灼器輕觸大腦中動(dòng)脈，使之凝閉，復制局灶性腦缺血模型。其中假手術(shù)組手術(shù)時(shí)只暴露大鼠大腦中動(dòng)脈，不予凝閉。治療組立即給予電針治療。
1?4治療方法
1?4?1穴位選擇穴位選取督脈經(jīng)穴“百會(huì )”、“大椎”，其定位參照大鼠的常用針灸穴位［7］：“百會(huì )”穴位于頂骨正中；“大椎”穴在第7頸椎與第1胸椎間，背部正中。
1?4?2刺法治療1組大鼠以30號1寸毫針斜刺入百會(huì )0?5寸，直刺入大椎0?5寸，將針柄分別連接至電針儀上，5~10Hz，疏密波，強度以大鼠安靜耐受為度，一般3~5V，時(shí)間30min，每天1次，均在上午10點(diǎn)左右進(jìn)行，治療2組于每天下午3時(shí)左右再治療1次，參數同前，均連續治療2周。而假手術(shù)組和缺血模型組大鼠只在同等條件下飼養，未予任何處理。
1?5神經(jīng)功能缺損評分（sNS)待大鼠蘇醒后（術(shù)后3h)及2周后分別觀(guān)察大鼠行為表現并進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分。方法：溫和地提起動(dòng)物尾巴，懸于地面上方1m高處；置于地面，輕輕側推其肩胛部，參照Bederson等［8］的評分方法行神經(jīng)檢查等級評分，評估大腦中動(dòng)脈阻斷后大鼠的神經(jīng)損傷狀況，3h時(shí)段缺血模型組與治療組評分1分以下者剔除，不作為觀(guān)察對象。評分標準：0分為向地面伸展兩前肢，未見(jiàn)行為異常；1分為腦損傷對側前肢持續地屈曲；2分為腦損傷對側前肢屈曲，腦損傷對側肩內收但無(wú)扭轉，側推抵抗力弱；3分為腦損傷對側前肢屈曲，腦損傷對側肩內收有扭轉，側推無(wú)抵抗力。
1?6麻醉、固定和手術(shù)造模14d后，大鼠以100g/L烏拉坦溶液（1?8g/kg腹腔注射)麻醉，藥量不夠可酌情補加10%。將麻醉后的大鼠固定在立體定位儀上，固定耳桿和上門(mén)齒，調整動(dòng)物向上傾約18°~22°，此角度每次實(shí)驗都需要重新測定，以確保電極是垂直插入。在缺血同側用剪刀小心剪開(kāi)皮膚，暴露頭骨，在電極要插入部分標記并打孔，孔徑2?5mm×2?5mm，分別去除碎骨片、硬腦膜和軟腦膜，暴露皮層，并滴入生理鹽水和石蠟油（以使皮層在實(shí)驗過(guò)程中保持濕潤）。體溫維持儀測定動(dòng)物體溫，在實(shí)驗過(guò)程中維持體溫在（37±1）℃，心電經(jīng)前放大器放大后，在示波器上顯示。
1?7刺激和記錄刺激電極為雙極電極，用兩根彼此接近但又相互絕緣（尖端除外，尖端直徑約100μm）的鋼絲構成，尖端相距約0?3mm，插入位點(diǎn)在海馬穿通纖維角狀束，相對

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