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綠色熒光蛋白標記的人血管內皮生長(cháng)因子165基因重組腺病毒載體的
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 田衛東 白曉峰 |
| 第1作者單位： | 4川大學(xué)華西口腔醫學(xué)院口腔頜面外科 |
| 論文摘要： | 目的 構建攜帶綠色熒光蛋白的高效重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165。方法 應用重組腺病毒構建系統，以細菌內質(zhì)粒間同源重組法構建復制缺陷型重組腺病毒載體。首先將VEGF165cDNA亞克隆到穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上，重組穿梭質(zhì)粒經(jīng)PmeⅠ酶切線(xiàn)性化后，轉入已含有腺病毒骨架載體的BJ5183中。同源重組后，重組的病毒質(zhì)粒pAdGFP/ hVEGF165經(jīng)卡那霉素平板篩選獲得。經(jīng)酶切分析鑒定后，重組病毒質(zhì)粒用PacⅠ酶切線(xiàn)性化，通過(guò)脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉染人胚腎293細胞。經(jīng)過(guò)包裝、擴增和純化后，測定病毒滴度。結果 重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ酶切鑒定，在凝膠電泳中獲得診斷性片段，轉染的293細胞出現了明顯的細胞病變效應。PCR鑒定括增出測定相應的片段。重組腺病毒的滴度為：6×109pfu/m。結論 應用重組腺病毒構建系統，以細菌內質(zhì)粒間同源重組法可成功地獲得重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165，重組腺病毒載體中含有GFP的標記基因可直觀(guān)檢測靶細胞轉染和外源基因的表達情況，為今后深入研究VEGF基因治療奠定實(shí)驗基礎。 |
| 關(guān)鍵詞： | 腺病毒載體，血管內皮生長(cháng)因子，同源重組 遠程下載 論文(免費PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2005年06月13日 |
| 同行評議： | （暫時(shí)沒(méi)有） |
| 綜合評價(jià)： | （暫時(shí)沒(méi)有） |
| 修改稿： |
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