淺析兒童三種肺炎支原體檢測法的臨床應用

【摘要】 目的 探討肺炎支原體（MP）咽拭子快速液體培養法、咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清MP被動(dòng)凝集法（MP-Ab）等方法在兒童MP感染診斷治療過(guò)程中的敏感性。方法 采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進(jìn)行配對研究，每個(gè)患兒取咽拭子做快速培養和PCR，同時(shí)取血清做MP-Ab檢測，對3種方法的檢測結果與臨床診斷治療病例進(jìn)行回顧性分析。結果 回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養法檢出陽(yáng)性78例，陽(yáng)性率為51.3%，病程為（4.5±2.6）天；PCR法檢測出陽(yáng)性103例，陽(yáng)性率為67.8%，病程為（6.2±3.5）天；MP-Ab法檢測出陽(yáng)性127例，陽(yáng)性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。結論 3種MP檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床醫生應根據患兒病程選取檢測方法，以提高陽(yáng)性檢出率和敏感性。
【關(guān)鍵詞】 肺炎支原體；快速培養法；咽拭子聚合酶鏈反應；血清抗體；配對研究
肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急性呼吸道感染的主要病原體之一，臨床上大多數表現為呼吸道感染綜合征，其中約3%～10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來(lái)一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進(jìn)行配對研究，通過(guò)病例回顧來(lái)探索對支原體肺炎敏感的實(shí)驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準確做出診治。
1 材料與方法
1.1 對象 收集湖南省兒童醫院檢驗科2006年1月1日～9月30日在呼吸免疫科就診住院患兒，有呼吸道感染癥狀，已經(jīng)初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象，其中男175例，女187例；年齡為2個(gè)月～12歲，病程為1～90天。
1.2 方法 具體方法有：（1）用MP快速培養法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對362例研究對象同時(shí)進(jìn)行檢測，記錄結果。（2）通過(guò)研究對象病歷回顧統計MP感染的例數，并按年齡、病程和3種MP檢測法結果進(jìn)行統計學(xué)分析。
1.3 臨床診斷MP感染的診斷標準 按文獻［1］、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷——即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無(wú)效者等；以及實(shí)驗室檢查3種檢測法至少有一種陽(yáng)性。病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開(kāi)始有癥狀或體征時(shí)開(kāi)始計算，到患兒來(lái)就診檢測時(shí)為止進(jìn)行計算。
1.4 MP快速培養法 支原體分離鑒別培養液由珠海市浪峰生物技術(shù)有限公司提供。清晨患兒未洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，將咽拭子用無(wú)菌生理鹽水處理，接種到預溫的培養基中，37 ℃培養；培養基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時(shí)，瓶底有藍色顆�；蛭镔|(zhì)沉淀為陽(yáng)性，5天后培養基顏色不變或無(wú)藍色顆�；蛭镔|(zhì)沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學(xué)達安基因股份有限公司提供。應用PCR法檢測MP-DNA，嚴格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以在紫外燈下出現180 bp擴增帶結果判為陽(yáng)性。每次試驗均設陽(yáng)性、陰性對照（陽(yáng)性對照為MP質(zhì)粒，陰性對照為無(wú)菌生理鹽水），由專(zhuān)人進(jìn)行操作，質(zhì)量控制。MP-Ab法：試劑為日本瑞必歐株式會(huì )社MP-Ab檢測試劑SERODIA-MYCOⅡ凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，抽取患兒靜脈血3 ml，采用明膠顆粒被動(dòng)凝集法，用血清檢測，結果以≥1∶40判斷為陽(yáng)性。每次試驗均設未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽(yáng)性、陰性血清進(jìn)行測定。
1.5 統計學(xué)方法 計量資料用均數±標準差（x±s）表示，各年齡組與3種檢測方法結果比較用Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽(yáng)性率比較用χ2檢驗；3種檢測方法陽(yáng)性結果與病程之間的比較用q檢驗。
2 結果
2.1 陽(yáng)性樣本 經(jīng)過(guò)回顧性診斷，在配對研究組362例研究對象中有152例符合MP感染的診斷標準，即有152例確診病例，其中肺炎45例，支氣管炎56例，上呼吸感染49例，支氣管哮喘2例。MP快速培養法檢測出78例陽(yáng)性，PCR法檢測出103例陽(yáng)性，MP-Ab法檢測出127例陽(yáng)性。
2.2 結果分析 各確診病例的年齡分布，見(jiàn)表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以3～4歲年齡段的病例最多，為46例，陽(yáng)性率最高，為70.77%，與其余年齡組段比較P

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