激情欧美日韩一区二区,浪货撅高贱屁股求主人调教视频,精品无码成人片一区二区98,国产高清av在线播放,色翁荡息又大又硬又粗视频

淺談基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應用

時(shí)間:2024-10-28 23:23:18 醫學(xué)畢業(yè)論文 我要投稿
  • 相關(guān)推薦

淺談基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應用

 
  [論文關(guān)鍵詞] 熒光PCR定量技術(shù);基因定位技術(shù);遺傳病

  [論文摘要]
熒光PCR定量技術(shù)(Quantitative PCR)是一種新興的基因定位技術(shù)。這項技術(shù)靈敏、簡(jiǎn)便、快速、不需使用放射性同位素,PCR完成后,通過(guò)測序儀的自動(dòng)識別即可對待測DNA進(jìn)行定量分析。在遺傳病,特別是一些以大片段缺失為主要突變類(lèi)型的遺傳病診斷中,熒光PCR定量技術(shù)發(fā)揮了很重要的作用。
  
    
  在早期的遺傳學(xué)分子診斷中,主要依賴(lài)于Southern Blotting,寡核苷酸雜交等技術(shù)。自1985年Saiki等首次描述聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)以來(lái),PCR技術(shù)因為其靈敏特異,省時(shí)省力等諸多優(yōu)點(diǎn)而受到了人們的高度重視,已經(jīng)應用于生物和化學(xué)等基礎研究的各個(gè)領(lǐng)域,并且成為醫學(xué)和法醫學(xué)研究的強有力分析工具之一[1-3]。然而,近幾年來(lái),研究者們不再滿(mǎn)足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著(zhù)眼于對其進(jìn)行精確的核酸定量。盡管把PCR作為一種定量的工具,在技術(shù)上還面臨著(zhù)一些挑戰。熒光PCR基因定位技術(shù)是近十余年來(lái)興起的一種分子生物學(xué)技術(shù),與其他定量方法相比,具有靈敏、簡(jiǎn)便、快速、不需使用放射性同
  位素的特點(diǎn),在基因表達、傳染病和遺傳病的診斷等方面迅速得到了廣泛應用。
  
  1 熒光PCR基因定位技術(shù)的原理
  
  熒光PCR定量技術(shù)的主要原理為:在PCR前,通過(guò)化學(xué)方法在引物的5’端通過(guò)共價(jià)方式連接一個(gè)熒光分子。由于在進(jìn)行PCR時(shí),引物和待擴增模板5’端的堿基不需要完全匹配,熒光PCR引物和普通PCR引物一樣,能夠對待測模板進(jìn)行指數擴增。擴增完成后,根據PCR的產(chǎn)量,將熒光PCR產(chǎn)物直接或按一定比例稀釋后,和內標、載樣緩沖液混合,在自動(dòng)測序儀上進(jìn)行電泳。在自動(dòng)測序儀內激光的激發(fā)下,PCR產(chǎn)物上的熒光分子發(fā)出固定波長(cháng)的激發(fā)光,被儀器內的光電管捕獲。根據PCR產(chǎn)物從開(kāi)始電泳到經(jīng)過(guò)光電管的時(shí)間,測序儀自動(dòng)計算出相應產(chǎn)物的實(shí)際堿基數。不同泳道之間電泳速度的差別,通過(guò)各產(chǎn)物內混合的內標校正。同時(shí),測序儀也自動(dòng)標出相應產(chǎn)物的熒光強度,該數值就是熒光PCR定量技術(shù)對模板進(jìn)行定量與定位的基礎。與非定量PCR分析方法不同,熒光PCR的操作程序有助于評估污染的情況,即測出污染的程度,即使陰性對照產(chǎn)生了正的信號,只要這些信號比實(shí)驗樣品的低得多,依據這樣的結果,至少可以推測出實(shí)驗中所得出的信號是真實(shí)的[4-6]。在一定程度上,熒光PCR消除了普通PCR過(guò)于敏感、假陽(yáng)性率高的缺點(diǎn)。熒光PCR常用于研究發(fā)病機制、估計病毒的負荷量、監測臨床治療進(jìn)展或用于診斷遺傳缺陷等。通過(guò)對靶基因量的檢測,將其與疾病的臨床表現、臨床分型以及各種標志酶的值聯(lián)系起來(lái),為疾病的診斷和物治療監測提供科學(xué)的依據。目前,該技術(shù)已廣泛應用于多種遺傳病的診斷和產(chǎn)前篩查,如地中海貧血、兒童型脊肌萎縮癥、杜氏/貝氏肌營(yíng)養不良、胖骨肌萎縮癥和各種染色體病等。
  
  2 熒光PCR基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應用
  
  2.1 在α地中海貧血中的診斷作用
  1988年,Chehab用兩對引物同時(shí)擴增α珠蛋白和β珠蛋白基因,并在這兩對引物上分別標記上羅丹明和熒光素。在紫外線(xiàn)的照射下,羅丹明產(chǎn)生紅色熒光而熒光素產(chǎn)生綠色熒光。在同一循環(huán)條件下PCR完成后,通過(guò)離心將擴增產(chǎn)物和游離引物分離,根據擴增后產(chǎn)物顏色直接判斷基因的缺失情況[7]。如產(chǎn)物為桔紅色,則說(shuō)明α和β珠蛋白基因都得了擴增。如果產(chǎn)物為綠色,說(shuō)明α珠蛋白基因缺失,只有顯綠色熒光的β珠蛋白基因得到了擴增。
  2.2 在DMD/BMD中的應用
  DMD/BMD(杜氏/貝氏肌營(yíng)養不良癥)是最常見(jiàn)的致死性神經(jīng)肌肉遺傳病。在男性中,其患病率約為1/3 500,為x連鎖隱性遺傳,其中73%為缺失或重復突變,新生突變占所有患者的30%。由于x染色體的隨機失活比例不同,約40%的DMD攜帶者不能通過(guò)血清CPKH活性診斷。1992年,schwartz將熒光PCR應用于該病的攜帶者診斷。他們采用熒光引物和測序儀分析位于肌營(yíng)養不良基因內部的4對CA重復序列。測序儀可以鑒別2個(gè)堿基對長(cháng)度的差異,能夠為連鎖分析提供更多的信息[8]。在以下情況時(shí),連鎖分析有時(shí)不足以對攜帶者進(jìn)行判斷:①CA重復不能提供信息,②家族成員不全,③新生突變或者嵌合體造成的連鎖分析失效,因此,他們還采用熒光PCR直接擴增肌營(yíng)養不良基因外顯子,并用測序儀定量分析產(chǎn)物,將結果和連鎖分析一起作為判斷攜帶者的依據。通過(guò)以上方法,他們對43名可疑攜帶者進(jìn)行了診斷。
  2.3 在PGD的應用
  植入前診斷(PGD)只能獲得非常有限的模版,而熒光PCR比溴乙錠染色要敏感1 000倍,因此,熒光PCR在植入前診斷中的應用已經(jīng)有較多的探索。等位基因失擴增(ADO)和污染是植入前診斷所面臨的兩個(gè)主要問(wèn)題,因此PGD需要檢測致病基因和連鎖分析進(jìn)行聯(lián)合判斷。但是限于取材,PGD只能提供一次PCR的模版。熒光PCR由于高靈敏度和分辨率,適合對少量模版進(jìn)行多重PCR擴增,在一個(gè)體系中同時(shí)完成對疾病基因的檢測和連鎖分析。Joycec采用熒光多重PCR對6種遺傳。簭娭毙约I(yíng)養不良(DM)、囊性纖維(CF)、脆性X綜合征、神經(jīng)纖維化2型和顱面成骨不全癥進(jìn)行了植入前診斷。在進(jìn)行PCR的過(guò)程中都同時(shí)擴增了一個(gè)多態(tài)位點(diǎn),以確定被擴增細胞的來(lái)源以及排除污染[9]。對于顯性遺傳病,多態(tài)位點(diǎn)還能夠減少ADO可能帶來(lái)的誤診。在他們進(jìn)行的研究中,對14次妊娠進(jìn)行的植入前診斷都得到明確結論,其中13例進(jìn)行了胚胎移植,另有1例沒(méi)有檢測到正常胚胎。
  總之,PCR技術(shù)在定量與定位領(lǐng)域中的應用已經(jīng)逐漸由實(shí)驗室中的探索發(fā)展成為理解復雜的生物本質(zhì)的一項關(guān)鍵技術(shù)。毫無(wú)疑問(wèn),在不久的將來(lái),熒光定量PCR技術(shù)將以其精確的定量,簡(jiǎn)單迅速的操作,合理的,在分子生物學(xué)、實(shí)驗,特別是醫學(xué)領(lǐng)域中得到更加廣泛的應用。
  
  [參考文獻]
  [1]J.薩姆布魯克, D.W拉塞爾. 分子克隆實(shí)驗指南[M].3版. 北京:科學(xué)出版社, 2002: 488.
  [2]彭志文,朱子平. PCR檢測乙肝DNA的注意事項[J].中國導報,2006,3(24):147.
  [3]魯軍.熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA的臨床意義[J].中國醫藥導報,2008,5(33):78.
  [4]劉煒,馬俊.FQ-PCR檢測沙眼衣原體及解支原體[J].中國現代醫生,2008,46(6):139-140.
  [5]羅燕春,李勇,鄭惠蘭,等.熒光定量PCR檢測淋球菌、沙眼衣原體結果探討[J].江學(xué),2005,23(6):615-616.
  [6]于曉芳,許晏,劉漪,等. PCR-BHEL技術(shù)對血清中HCV RNA的檢測[J].臨床和實(shí)驗醫學(xué)雜志,2008,7(9):40.
  [7]張正.分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗醫學(xué)中的應用[J].中華檢驗醫學(xué)雜志,2003,26:735-736.
  [8]Sangier Veber P. Detection of heterozygous SMN1 deletions in SMA families using a simple fluoreseent muitiplex PCR method[J].MedGenet,2001,38(4):240-243.
  [9]Joyeec.Preimplantation genetic diagnosis for single genedisorders: experience with five single genedisorders[J].PrenatDiagn,2002,22:525-533.
  

【淺談基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應用】相關(guān)文章:

談基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應用03-07

淺談RTK技術(shù)在公路測量中應用問(wèn)題03-19

淺談CAD技術(shù)在工程設計中的應用03-18

淺談安全技術(shù)在電子商務(wù)中的應用03-27

談CR系統在靜脈腎盂造影診斷技術(shù)中的應用03-18

淺談多媒體技術(shù)在創(chuàng )新能力培養中的應用12-01

淺談多媒體技術(shù)在數學(xué)教學(xué)中的應用03-18

淺談信息技術(shù)在英語(yǔ)教學(xué)中的應用05-09

淺談中、低檔旅游飯店的市場(chǎng)定位11-20

激情欧美日韩一区二区,浪货撅高贱屁股求主人调教视频,精品无码成人片一区二区98,国产高清av在线播放,色翁荡息又大又硬又粗视频