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堿性成纖維細胞生長(cháng)因子在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達的
作者:劉艷波 沈維高 趙雪儉【摘要】 目的 探討堿性成纖維細胞生長(cháng)因子(bFGF) 在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達的意義。方法 采用斑點(diǎn)雜交和免疫組化法測定50 例正常前列腺組織(正常對照組)、40 例良性前列腺肥大(BPH)組織和48 例前列腺癌組織中bFGF 的表達情況。結果 BPH和前列腺癌組織中bFGF的表達明顯高于正常對照組(P<0?01)。bFGF 表達升高的程度與BPH的分度、前列腺癌的病理分級和臨床分期關(guān)系不顯著(zhù)。結論 bFGF 與前列腺癌和前列腺增生的發(fā)生發(fā)展過(guò)程有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 前列腺增生;前列腺癌;堿性成纖維細胞生長(cháng)因子(bFGF)
前列腺癌和前列腺增生是老年男性常見(jiàn)疾病。近年來(lái)研究資料表明前列腺癌和前列腺增生組織中存在許多分子表達異常,但是對其發(fā)病機制尚缺乏統一的認識〔1,2〕。堿性成纖維細胞生長(cháng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一種常見(jiàn)的內皮細胞分裂原,通過(guò)自分泌或旁分泌機制促進(jìn)血管的生成、組織再生、抑制細胞凋亡及增強細胞侵襲能力等,與許多疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。研究結果顯示bFGF在前列腺癌和前列腺增生的發(fā)病過(guò)程中也發(fā)揮重要的作用〔3~7〕。我們采用斑點(diǎn)雜交和免疫組化染色方法,觀(guān)察了bFGF 在正常前列腺、良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia,BPH)和前列腺癌組織中的表達及其與臨床的關(guān)系,并探討其臨床意義。
1 材料與方法
1?1 材料
選取吉林大學(xué)第三臨床醫院手術(shù)切除的BPH標本40例,年齡55~73(平均62)歲。Rous分度:Ⅰ度8 例,Ⅱ度12例,Ⅲ度9例,Ⅳ度11例。前列腺癌標本48 例,年齡54~71(平均66) 歲。WHO分級:高分化15例,中分化19例,低分化14例;Whitmore?Jewett 分期:A期12例,B期10例,C期16例,D 期10例。另取50例意外死亡者的正常前列腺標本作為對照,年齡36~59 (平均49)歲。
1?2 試劑
熒光素標記試劑盒購自華美公司。鼠抗人bFGF 單抗(mAb) 購自Invitrogen 公司。兔抗鼠IgG和ELISA試劑購自福州邁新生物試劑公司。限制性?xún)惹忻窫coRⅠ和HindⅡ購自寶生物公司。DAB顯色試劑盒購自南京建成生物試劑公司。
1?3 方法
1?3?1 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的斑點(diǎn)雜交
、偬结樦苽浜蜆擞洠篵FGF 質(zhì)粒轉化、擴增及提取,參照文獻〔4〕方法進(jìn)行,所得bFGF 質(zhì)粒經(jīng)EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收探針片段。探針標記采用熒光素標記試劑盒隨機引物法。②細胞總RNA 提。翰捎卯惲蚯杷犭乙徊椒。③RNA斑點(diǎn)雜交:以相同濃度總RNA點(diǎn)膜。④檢測:采用試劑盒發(fā)光自顯影法檢測,顯影膠片應用計算機圖像分析技術(shù)測定斑點(diǎn)平均吸光度( A) 值。
1?3?2 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的免疫組化染色
鼠抗人bFGF mAb 孵育前,用微波爐進(jìn)行抗原修復10 min,鼠抗人bFGF mAb 的工作濃度1∶100。用PBS 代替鼠抗人bFGF mAb 作為陰性對照,以DAB顯色,透明封片。
1?4 判定標準
所有陽(yáng)性染色特征為棕黃色顆粒,位于細胞胞質(zhì)內。隨機觀(guān)察5~10 個(gè)視野,計算100 個(gè)腺上皮細胞或癌細胞陽(yáng)性細胞數,取其均值。陽(yáng)性細胞數<10%者(-),10%~29%者( ),30%~59%者(?),≥60%者(?)。
1?5 統計學(xué)處理
應用SPSS10?0軟件包進(jìn)行統計分析,數據用x±s表示,采用χ2及秩和檢驗。
2 結果
2?1 各組bFGF mRNA表達量比較
正常對照組中bFGF mRNA表達量低(23±11), BPH組(178±29)和前列腺癌組(265±24)中bFGF mRNA表達較高。前列腺癌及BPH組織中mRNA表達水平與正常對照組之間比較差異顯著(zhù)(P<0?05) 。
2?2 不同分化程度的BHP組織中bFGF mRNA表達水平比較
BHPⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度組織bFGF mRNA表達水平(pg/μl)分別為197±24(n=8)、186±27(n=12)、169±22(n=9)、188±31(n=11)。經(jīng)方差分析,4組組間bFGF mRNA的表達無(wú)明顯差異,提示bFGF mRNA的表達與BPH的分化無(wú)明顯關(guān)系。
2?3 不同分化程度的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達水平比較
高、中、低分化的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達水平(pg/μl)分別為273±28(n=15)、261±29(n=19)、254±20(n=14)。經(jīng)方差分析,三者bFGF mRNA的表達無(wú)明顯差異,提示bFGF mRNA的表達與前列腺癌的病理分級無(wú)明顯關(guān)系。
2?4 各組免疫組化染色結果比較
見(jiàn)圖1。正常對照組 bFGF呈陰性,BPH組陽(yáng)性表達率為72?5%(29/40),與正常對照組比較差異顯著(zhù)(P<0?05) 。BPH陽(yáng)性病例中,陽(yáng)性染色主要位于基質(zhì)細胞。前列腺癌組bFGF 的表達率為76?7%(36/48),其中“ ”15 例,“?”19例,“?”14例,陽(yáng)性染色位于癌細胞質(zhì),與正常對照組比較差異顯著(zhù)(P<0?05) 。bFGF 的染色強度與前列腺癌的病理分級、臨床分期及BPH 的分度均無(wú)圖1
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