免疫多糖對幼魚(yú)性能的影響論文
草魚(yú)是當前我國養殖量最大的淡水養殖品種之一，年產(chǎn)量超過(guò)400萬(wàn)t，在草魚(yú)的飼養過(guò)程中，苗種階段的飼養至關(guān)重要，該階段幼魚(yú)處在生長(cháng)發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，且這時(shí)期水溫逐漸升高，水體中病原微生物復雜多變，幼魚(yú)病害較多（腸炎、出血、爛鰓和白頭白嘴病等），病死率高。為了提高該時(shí)期苗種的成活率，養殖戶(hù)通常會(huì )采取一些預防性措施，比較常規的措施就是在該時(shí)期的幼魚(yú)餌料中適量加入一些抗生素藥物來(lái)降低病害的發(fā)生率，然而隨著(zhù)當前抗生素藥物的使用逐漸受到限制，一些免疫增強劑逐漸被人們關(guān)注。免疫增強劑是一個(gè)有著(zhù)廣闊應用前景的新興領(lǐng)域，水產(chǎn)中較常用的免疫增強劑主要有合成化學(xué)劑類(lèi)、微生物類(lèi)衍生物、動(dòng)植物提取物、維生素和乳鐵蛋白等，它們的生物相容性好、可降解、不會(huì )造成環(huán)境污染且對人類(lèi)安全，并且能顯著(zhù)提高細胞吞噬活性和溶菌酶活性，增強機體清除超氧化陰離子的能力。免疫增強劑主要通過(guò)非特異性免疫因子來(lái)達到防病和抗病目的，雖然不產(chǎn)生免疫記憶，但卻能夠在短期內顯著(zhù)提高機體的抗病能力。酵母免疫多糖就是一種富含β-葡聚糖和1,3-甘露寡糖的天然免疫增強劑，由于其使用方便而日漸受到人們的青睞。文章就酵母免疫多糖在草魚(yú)苗種中的應用試驗來(lái)探討酵母免疫多糖對草魚(yú)生長(cháng)性能及免疫功能的改善，從而為提高苗種階段草魚(yú)的成活率提供一種新的思路和理論依據。
1材料與方法
1.1試驗飼料配方及試驗設計
基礎飼料1為含4%魚(yú)粉的實(shí)用飼料，基礎飼料2不含魚(yú)粉，其組成及營(yíng)養成分含量見(jiàn)表1。飼料原料全部經(jīng)粉碎，過(guò)60目篩，微量成分采取逐級擴大法添加，與大宗原料混合均勻后，加工成直徑為1.5mm的顆粒，經(jīng)600℃烘干、破碎和過(guò)篩，最終篩選出直徑在0.3~0.45mm的顆粒置于-20℃冰箱備用。根據不同的酵母免疫多糖添加量，分組進(jìn)行試驗，其中2個(gè)對照組，7個(gè)試驗組，共9個(gè)處理，分別為含有4%魚(yú)粉試驗組的4個(gè)處理（0、0.5、1和2g/kg酵母免疫多糖）和不含4%魚(yú)粉的試驗組的5個(gè)處理（0、0.5、1、2和5g/kg酵母免疫多糖）。
1.2試驗魚(yú)的飼養管理
試驗共設9個(gè)處理，每處理組設4個(gè)平行，相應安排36個(gè)水族箱（70cm×35cm×95cm），每個(gè)水族箱容水量為200L，靜水，氧氣頭不間斷增氧，每天換掉1/3的水并及時(shí)加注新水。飼養試驗在安琪酵母公司當陽(yáng)試驗場(chǎng)進(jìn)行，試驗用魚(yú)為草魚(yú)幼魚(yú)，試驗魚(yú)從魚(yú)塘取出時(shí)先經(jīng)藥液浸浴消毒后，暫養在水族箱中，用基礎飼料馴化2周，待魚(yú)安定并習慣后開(kāi)始試驗。每箱放養30尾，試驗開(kāi)始時(shí)幼魚(yú)平均體質(zhì)量（4.10±0.10）g，試驗魚(yú)規格整齊且健康活潑，隨機分配到各水族箱中，每天投飼量約占體質(zhì)量的2%，日投喂4次（早上07：00、中午11：00、下午15：00和晚上19：00），每次投餌時(shí)做到少量多次，讓幼魚(yú)盡量飽食，幼魚(yú)不搶食時(shí)停止投食。每周定期消毒2次，養殖試驗期間水溫（27±2）℃，溶解氧>5.0mg/L、NH3-N<0.3mg/L，晝夜持續供氣，飼養時(shí)間2010年8月20日至10月1日，共40d。
1.3樣品收集和分析
在養殖試驗開(kāi)始前及結束后，將各處理組的幼魚(yú)稱(chēng)質(zhì)量，統計各處理組的增質(zhì)量情況，試驗期間每天統計各組魚(yú)的采食量。試驗結束后，魚(yú)禁食1d后稱(chēng)質(zhì)量，每個(gè)試驗水箱隨機取出3尾魚(yú)用MS-222麻醉后從尾鰭靜脈取血，血樣放置在4℃冰箱中保存約3h，待血清充分析出后，在3000r/min下離心15min，分離出上層血清轉入1.5mL離心管中，用日立HITACHI7600-120全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液生化指標測定。
1.4測定指標與方法
試驗開(kāi)始后，每天統計各試驗組幼魚(yú)的死亡情況，死魚(yú)及時(shí)撈出并測定其體質(zhì)量，并以此來(lái)矯正試驗結束時(shí)該試驗組的總增質(zhì)量。餌料系數=總投飼量（g）／（末質(zhì)量-初質(zhì)量）（g）；病死率=試驗幼魚(yú)死亡數／試驗初魚(yú)尾數×100%
1.5數據處理和統計方法
試驗結果用平均數±標準差表示，試驗數據通過(guò)SPSS16.0統計軟件進(jìn)行處理分析，數據先用單因素方差分析進(jìn)行處理，百分數需經(jīng)過(guò)平方根反正弦轉換，若組間有差異，再用Duncan氏多重比較法檢驗不同酵母免疫多糖添加量下草魚(yú)幼魚(yú)的生長(cháng)性能、病死率及血液各項指標間的差異顯著(zhù)性，P<0.05為顯著(zhù)性水平。
2試驗結果分析
2.1草魚(yú)幼魚(yú)存活率
從表2和表3可見(jiàn)：經(jīng)過(guò)40d飼養，在含有魚(yú)粉的飼料中添加酵母免疫多糖能減低幼魚(yú)的病死率，0.5‰~2‰不同梯度多糖添加對幼魚(yú)的存活率影響不大，且隨著(zhù)添加量的增加，累計病死率逐漸降低。而在不含有魚(yú)粉的草魚(yú)幼魚(yú)飼料中添加酵母免疫多糖對病死率影響較大，對照組40d試驗期間累計病死率達到20.83%，是所有處理組中病死率最高的，在不含魚(yú)粉的飼料中添加酵母免疫多糖后，與該對照組相比草魚(yú)幼魚(yú)的成活率有較大幅度的提升，并隨著(zhù)添加量的增加各組幼魚(yú)病死率有逐漸降低的趨勢，5‰添加組在整個(gè)試驗周期未見(jiàn)幼魚(yú)死亡。
2.2草魚(yú)幼魚(yú)生長(cháng)性能的變化
從表2和表3可見(jiàn)：在含有魚(yú)粉或不含魚(yú)粉的草魚(yú)飼料中不同比例添加酵母免疫多糖能有效降低餌料系數，其中在含有魚(yú)粉的飼料中添加0.5‰酵母免疫多糖降低餌料系數的比例最大，與魚(yú)粉對照組相比降幅達12.4%，不同酵母免疫多糖添加量間的餌料系數沒(méi)有表現出顯著(zhù)差異，0.5‰多糖組表現出最佳的生長(cháng)性能，幼魚(yú)病死率低，增質(zhì)量最明顯。在不含魚(yú)粉的飼料中使用酵母免疫多糖也能顯著(zhù)降低餌料系數，其中5‰多糖組的生長(cháng)狀況最佳，整個(gè)試驗結束時(shí)未出現死亡情況且增質(zhì)量最明顯。魚(yú)粉添加組幼魚(yú)的生長(cháng)性能普遍好于未添加魚(yú)粉組，從表3可見(jiàn)：酵母免疫多糖的添加極大地改善了無(wú)添加魚(yú)粉組幼魚(yú)的生長(cháng)性能。
2.3草魚(yú)血液生化指標的變化
從表4可見(jiàn)：血清中谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶的活性及免疫球蛋白含量，隨著(zhù)酵母免疫多糖添加量的增加有降低的趨勢，其中2‰多糖組的以上2指標顯著(zhù)低于其他低劑量組（0.5‰多糖組和1‰多糖組）和對照組1，而0.5‰多糖組、1‰多糖組和對照組1三者間在這2項指標上不存在顯著(zhù)性差異；血清中免疫球蛋白含量和堿性磷酸酶活性隨著(zhù)酵母多糖添加量的增加有逐漸增加的趨勢，其中1‰多糖組及2‰多糖組血清中堿性磷酸酶活性顯著(zhù)高于對照組1及0.5‰多糖組。從表5可見(jiàn)，2‰多糖組及5‰多糖組血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶活性顯著(zhù)低于對照組2和酵母免疫多糖低劑量添加組，血清中免疫球蛋白含量及堿性磷酸酶活性有隨酵母免疫多糖添加量的提高而增加的趨勢，特別是多糖添加組血清中堿性磷酸酶活性均顯著(zhù)高于對照組2。
3討論
酵母免疫多糖是酵母細胞壁的重要組成部分，占酵母細胞壁干質(zhì)量的40%，因提取方式的不同，其組成也有所變化，其主要成分為β-葡聚糖和甘露寡糖。酵母細胞壁多糖能激發(fā)和增加機體的免疫力和抗病力，對細菌、真菌和病毒引起的水產(chǎn)動(dòng)物疾病及運輸、分塘、氣候變化和養殖水環(huán)境變化等引起的應激反應產(chǎn)生非特異性免疫力，從而降低由應激導致的疾病發(fā)生率。
3.1酵母免疫多糖對草魚(yú)幼魚(yú)病死率及生長(cháng)性能的影響
通過(guò)試驗可見(jiàn)，在草魚(yú)飼料當中適當添加酵母細胞壁多糖確實(shí)能提高草魚(yú)幼魚(yú)的生長(cháng)性能，降低幼苗階段的病死率。尤其是對于沒(méi)有添加魚(yú)粉的飼料組來(lái)說(shuō)，酵母免疫多糖的添加不僅有效降低成本，而且顯著(zhù)降低了餌料系數，促進(jìn)了幼魚(yú)的快速生長(cháng)。酵母免疫多糖能提高草魚(yú)苗種的成活率和生產(chǎn)性能，可能主要由于酵母免疫多糖的添加激活了幼魚(yú)自身免疫系統，從而提高了幼魚(yú)對周?chē)鷳ぜ梆B殖病害的抵抗能力，一方面減少養殖病害的發(fā)生，另一方面減少了機體在應對病原菌方面的能量消耗進(jìn)而間接促進(jìn)了生長(cháng)性能的提高，與李海燕對豐產(chǎn)鯽的研究結果相一致。酵母免疫多糖的添加增加了飼料的適口性，進(jìn)而增強了幼魚(yú)采食餌料的主動(dòng)性并提高采食量。在日常投飼過(guò)程中我們也發(fā)現添加了酵母免疫多糖的餌料明顯具有誘食作用，草魚(yú)幼魚(yú)表現出集群和搶食等現象，而沒(méi)有添加酵母免疫多糖的對照組幼魚(yú)采食不積極。推測主要是因為該酵母免疫多糖中還含有未被完全分離的酵母抽提物，而酵母抽提物中含有豐富的氨基酸和核苷酸能顯著(zhù)改善飼料原料的適口性，促進(jìn)動(dòng)物采食。Brunt等2005年也報道了用含酵母免疫多糖（2.5‰的添加量）的飼料作為虹鱒幼苗的開(kāi)口餌料能顯著(zhù)提高幼苗的攝食量，最終提高幼魚(yú)的成活率及體長(cháng)和體質(zhì)量。
3.2酵母免疫多糖對草魚(yú)幼魚(yú)血液生化指標的影響
關(guān)于酵母免疫多糖對水產(chǎn)動(dòng)物的免疫效果的影響，以前已經(jīng)做過(guò)一些試驗，試驗表明：酵母免疫多糖對提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫能力效果明顯。試驗也再次驗證了這一結論，表明在草魚(yú)幼魚(yú)飼料中添加酵母免疫多糖，對提高攝食量和增質(zhì)量及降低病死率和料重比有明顯的效果。試驗結果表明：在飼料中添加一定質(zhì)量濃度的酵母免疫多糖，能夠顯著(zhù)降低病死率和料重比，同時(shí)增加草魚(yú)的攝食量，對草魚(yú)的肝功能也有一定改善效果，這與異育銀鯽的研究結果相一致。血清中酶活性主要來(lái)源于肝膽系統，試驗顯示，飼料中添加酵母多糖能顯著(zhù)降低谷丙谷草轉氨酶的活性，預示著(zhù)具有保護肝組織結構完整性和改善肝功能的作用。堿性磷酸酶是一種重要的代謝調控酶，與DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的代謝有關(guān)，對水生動(dòng)物的生長(cháng)有重要意義，也是溶菌體酶的重要組成部分，在免疫反應中發(fā)揮作用，試驗中與對照組相比酵母免疫多糖的添加提高了堿性磷酸酶活性，使機體處于良好的生理狀態(tài)，維持機體旺盛的代謝功能，草魚(yú)幼魚(yú)從而表現出良好的生長(cháng)狀態(tài)，機體非特異性免疫力也有所提高。
4結論
酵母免疫多糖具有提高存活率和促生長(cháng)作用，同時(shí)能減少抗生素類(lèi)藥物的用量，是控制水產(chǎn)養殖動(dòng)物特別是甲殼類(lèi)動(dòng)物傳染性病害的有效途徑，有利于水產(chǎn)養殖業(yè)的健康發(fā)展。是一種安全、可靠且能廣泛應用的免疫增強劑，一般來(lái)說(shuō)在疾病預防期或萌發(fā)期使用最為有效，隨著(zhù)研究的深入和認識的加深，它必將成為控制水產(chǎn)動(dòng)物疾病的有效工具。
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