抗酸桿菌痰涂片檢驗的實(shí)驗室生物安全
抗酸桿菌痰涂片檢驗作為對傳染性肺結核的診斷手段比X線(xiàn)診斷準確性高；作為實(shí)驗方法，技術(shù)相對簡(jiǎn)單，容易標準化和完成操作；其投入設備少、成本低；從收到標本到報告結果的時(shí)間短，能夠及時(shí)、準確地評價(jià)涂陽(yáng)患者的治療效果，被我國設為結核病控制項目的主要實(shí)驗室檢驗方法。但結核分枝桿菌（抗酸桿菌）為二類(lèi)高致病性病原菌，其自身的生物學(xué)特性使其容易在實(shí)驗室造成對工作人員及相關(guān)人員的感染和環(huán)境的污染，形成對公眾的傷害，操作結核分枝桿菌的實(shí)驗室人員結核病發(fā)病率比其他人群高三倍，因此抗酸桿菌痰涂片檢驗的實(shí)驗室安全問(wèn)題已經(jīng)成為當前結核病防治機構實(shí)驗室必須關(guān)注的問(wèn)題目前，在市、縣、鄉級結核病防治機構沒(méi)有建立BSL-2實(shí)驗室的情況下，就更好地保障實(shí)驗室的生物安全問(wèn)題，本人根據多年的工作經(jīng)驗，談一些粗淺的看法。
實(shí)驗室的生物安全工作的開(kāi)展應遵循科學(xué)合理、安全首位、軟件在先、嚴格管理、遠離病原、預防為主、使用方便、厲行節約的原則，具體實(shí)施如下：
實(shí)驗室首先要配備必須的安全設施：
1）有獨立的實(shí)驗室，室內有上下水，通風(fēng)良好；
2）室內設通風(fēng)柜、高壓滅菌器、紫外線(xiàn)燈、廢物桶、感應水龍頭；
3）標本的收集、涂片、染色、鏡檢、登記和涂片的儲存應在各自獨立的區域；
4）設有獨立生物咳痰室，內設紫外線(xiàn)燈（按1.5W每立方米計算），每個(gè)病人咳痰后必須打開(kāi)紫外線(xiàn)燈滅菌，如果沒(méi)有此設施，要叮囑病人在遠離人群的開(kāi)放空間留取標本，防止肺結核病人咳漱產(chǎn)生的結核桿菌氣溶膠造成對人的傳播及對環(huán)境的污染。
其次要做好個(gè)人防護，實(shí)驗室工作人員要配備一次性聚氯乙烯手套、一次性帽子、口罩、鞋套和防護服。
第三要使用以下消毒劑：5%的苯酚溶液、75%的酒精、甲醛、2%的戊二醛及2%的乙醛溶液。
在操作環(huán)節上，嚴格遵守以下方法和措施：
實(shí)驗前首先要用紫外線(xiàn)燈將操作臺面及室內照射一小時(shí)，工作人員進(jìn)入實(shí)驗室前必須穿好防護服、戴上口罩、手套、鞋套，病檢查有無(wú)破損；女檢驗員長(cháng)發(fā)束在帽內；操作人員在操作時(shí)應嚴格遵守實(shí)驗室安全操作規程和標準化操作程序（SOP)；在實(shí)驗過(guò)程中，禁止一切與實(shí)驗無(wú)關(guān)的活動(dòng)，保證集中精力完成操作；在操作過(guò)程中，要警惕分枝桿菌氣溶膠的產(chǎn)生，涂片操作要小心謹慎，動(dòng)作輕緩，固定和染色操作時(shí)產(chǎn)生氣溶膠的幾率較大，Allen Bw實(shí)驗結果表明，樣品熱固定不能殺滅所有涂片標本中的結核桿菌，若涂片長(cháng)時(shí)間暴露在高溫中，殘留活菌減少，并僅見(jiàn)于涂片厚的部分，從而提高熱固定時(shí)痰液對細菌的保護作用，新鮮痰液粘滯度越大，加熱固定時(shí)對細菌的保護作用越強，為避免此風(fēng)險，操作人員要做到雙手伸入操作臺操作，面部通過(guò)通風(fēng)柜的玻璃與操作臺面隔開(kāi)（在操作過(guò)程只利用通風(fēng)柜的屏障功能）；完成涂片后立即染色，若不能及時(shí)染色涂片，應浸泡在2%乙醛溶液中，不可以將涂片暴露在空氣中，涂片在空氣中暴露的時(shí)間越長(cháng)，感染的機會(huì )越大，這是操作者尤其需要注意的問(wèn)題；另外涂片不能涂抹太厚尤其是新鮮痰液；經(jīng)過(guò)染色的結核分枝桿菌已不能存活。 實(shí)驗結束后，所有物品歸放原位，標本盒及其他廢棄物放入5%的苯酚溶液廢物桶中，涂片用鑷子夾取放入儲存柜內，用5%的苯酚溶液擦拭玻片夾、放置標本的搪瓷盒、臺面，鑷子放在75%的酒精中浸泡，關(guān)上通風(fēng)柜的玻璃窗，打開(kāi)通風(fēng)柜紫外線(xiàn)燈；操作人員在實(shí)驗室近門(mén)處依次脫掉帽子、防護服、鞋套、手套裝入高壓滅菌袋，用肥皂洗手，流水沖洗；出門(mén)后打開(kāi)室內紫外線(xiàn)燈，關(guān)好門(mén)；兩小時(shí)后關(guān)閉紫外線(xiàn)燈、例行安全檢查后關(guān)閉門(mén)窗離開(kāi)；一次性手套、帽子、鞋套、過(guò)期的涂片和經(jīng)過(guò)24小時(shí)浸泡的廢棄物經(jīng)高壓滅菌后按醫療垃圾處理；高壓滅菌時(shí)采用生物或化學(xué)指示劑以確保滅菌效果；防護服在每次實(shí)驗完畢后均需高壓滅菌。
為確保實(shí)驗室生物安全，還要建立建全規章制度并嚴格遵守。規章制度主要強調以下幾個(gè)方面：
1）操作人員上崗前必須經(jīng)過(guò)嚴格的生物安全培訓。
2）實(shí)驗室管理方面，應嚴格限制非實(shí)驗室人員進(jìn)入實(shí)驗室，減少實(shí)驗室內外感染的機會(huì )，實(shí)驗室必須保持肅靜，操作人員進(jìn)入實(shí)驗室盡量避免攜帶非必須物品，實(shí)驗臺上不放置任何與實(shí)驗無(wú)關(guān)的物品，禁止吸煙、飲食及用嘴濕潤筆或標簽等，不要用手撫摸頭面部。
3）制定實(shí)驗室和咳痰室定期消毒制度。
4)制定操作員定期肺部檢查制度。
除建立健全規章制度外，還要制定實(shí)驗室應急預案，包括防水、防火、意外暴露的處理及污染消毒等。
總之，實(shí)驗室生物安全不僅涉及操作人員自身安全，還涉及他人健康，所以這個(gè)問(wèn)題必須引起我們高度重視，以便更好地保障結核病控制項目的實(shí)施成果。
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