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CDC25B3基因RNAi慢病毒載體的構建與鑒定
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 張齊 范健 石欣 孔波 肖志 楊正平 |
| 第1作者單位： | 東南大學(xué)附屬中大醫院普外科 江蘇南京 210009 |
| 論文摘要： | 目的 構建CDC25B3基因RNAi慢病毒載體。方法 針對已經(jīng)篩選確定的CDC25B3基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，退火形成雙鏈DNA，與經(jīng)Hpa I 和Xho I酶切后的pGCL-GFP載體[含U6啟動(dòng)子和綠色熒光蛋白(GFP)]連接產(chǎn)生LV-shCDC25B3慢病毒載體，PCR篩選陽(yáng)性克隆，測序鑒定。用LV-shCDC25B3，pHelper 1.0和pHelper 2.0質(zhì)粒共轉染包裝細胞293T細胞，包裝產(chǎn)生慢病毒，以293T細胞GFP蛋白的表達水平測定病毒滴度。結果 PCR和測序證實(shí)，成功構建CDC25B3shRNA的慢病毒載體LV-shCDC25B3。結論 成功構建人CDC25B3基因RNAi慢病毒載體。 |
| 關(guān)鍵詞： | RNA干擾；CDC25B；胰腺癌；慢病毒 遠程下載 論文(免費PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2007年02月03日 |
| 同行評議： | 先進(jìn)性：CDC25B在腫瘤中已有不少研究，但在胰腺癌中研究較少，有1定的先進(jìn)性。CDC25B的RNAi已有文章報道（2004年），本文獨立設計構建CDC25B3的RNAi亦可。 技術(shù)路線(xiàn)和結果：是較為成熟的技術(shù)路線(xiàn)，基本上沒(méi)有問(wèn)題。但有1點(diǎn)存在1些疑問(wèn)：在RNAi轉染對CDC25B蛋白表達抑制的效果時(shí)，采用與CDC25B載體共轉染293細胞。這樣，CDC25B轉染的效率會(huì )影響效果的判斷，同時(shí)，CDC25B載體為CMV強啟動(dòng)子PcDNA載體，會(huì )高表達轉染的CDC25B，但設計的RNAi仍能高效的抑制CDC25B。 在此步中，如采用穩定轉染CDC25B的293細胞，或者結構性表達CDC25B的細胞為靶細胞，就不存在以上問(wèn)題。 評論：本論文利用pGL－GFP載體構建CDC25B基因RNAi慢病毒載體，經(jīng)篩選有效的RNAi靶序列后，成功載體連接、轉染和病毒包裝、產(chǎn)毒，經(jīng)酶切、PCR和測序鑒定構建成功。設計合理，技術(shù)路線(xiàn)可行。構建的載體可用于CDC25B基因功能研究，具有1定的實(shí)用性和先進(jìn)性。 |
| 綜合評價(jià)： | |
| 修改稿： | |
| 注：同行評議是由特聘的同行專(zhuān)家給出的評審意見(jiàn)，綜合評價(jià)是綜合專(zhuān)家對論文各要素的評議得出的數值，以1至5顆星顯示。 | |
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