Tie2在鼠急性肺損傷中的表達及意義
【摘要】 目的 探討Tie?2在急性肺損傷（acute Iung injury,ALI）中的表達及意義。方法 24只Wistar大鼠隨機分為對照組與模型組，每組各12只，對照組采用假手術(shù)處理，模型組采用盲腸結扎穿孔術(shù)（cecal ligation and puncture,CLP）制作ALI模型，分別于假手術(shù)及CLP術(shù)后12 h處死全部大鼠，取右肺石蠟包埋，行HE染色，采用免疫組織化學(xué)法檢測Tie?2在鼠肺組織中的表達分布。結果 對照組在支氣管上皮細胞、平滑肌細胞及內皮細胞表達Tie?2。模型組在肺泡間隔及肺泡腔內中性粒細胞及巨噬細胞均有強陽(yáng)性的表達，在Tie?2陽(yáng)性的炎癥細胞附壁區域，內皮細胞Tie?2表達亦增強，支氣管上皮細胞表達相對減弱，平滑肌細胞表達未見(jiàn)明顯差別。結論 ALI模型鼠肺組織中中性粒細胞及巨噬細胞表達Tie?2，同時(shí)內皮細胞Tie?2表達增強。
【關(guān)鍵詞】 急性肺損傷； Tie?2；盲腸結扎穿孔術(shù)
【Abstract】 Objective To explore expression and significance of and Tie?2 receptor in a rat model of acute lung injury. Methods The rat model of acute lung injury(ALI) was made by cecal ligation and puncture(CLP). Wistar rats were devided into control group and model group,and were killed 12 hours after shaming or CLP. Right lungs were embedded in paraffin.The expression and distribution of Tie?2 receptors in lung was observed by Immunohistochemistry. Results Tie?2 receptors were expressed in bronchial epithelial cells，smooth muscle cells and endothelial cells in control group.There were higher expressions on neutrophils and macrophages in lung interstitial and alveolar space. In adhesion location of Tie?2 receptors positive inflammatory cells,there was higher staining in endothelial cells, whereas there were relatively decreased expressions on bronchial epithelial cells. There were no distinct difference on smooth muscle cells between two groups.Conclusion Neutrophils and macrophages express Tie?2 receptors,and meanwhile endothelial cells have higher expressions in the lung of the rat model of acute lung injury.
【Key words】 acute lung injury,Tie?2,cecal ligation and puncture
急性肺損傷（Acute Lung Injury,ALI）常是嚴重感染中毒癥(severe sepsis)的嚴重并發(fā)癥，病理上表現為肺部大量炎性細胞的浸潤，肺水腫的形成。Tie?2為血管生成素（Angiopoietin,Ang）家族受體，研究發(fā)現Tie?2在炎癥反應中起重要作用，在鼠ALI模型中存在Tie?2表達下降及磷酸化受阻現象［1］，但其具體表達分布不明。本研究通過(guò)盲腸結扎穿孔術(shù)（cecal ligation and puncture,CLP）誘導sepsis制作鼠ALI模型，檢測Tie?2在A(yíng)LI鼠肺臟中的表達分布并探討其在A(yíng)LI中的意義。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗主要試劑 濃縮型Tie?2兔抗鼠多克隆抗體、sABC試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
1.2 實(shí)驗分組 健康清潔級成年雄性Wistar大鼠24只（山東大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心提供），隨機分為兩組，對照組12只，模型組12只。
1.3 ALI大鼠模型制備及標本處理
1.3.1 ALI大鼠模型制備：術(shù)前大鼠禁食12 h，禁水8 h，3%水合氯醛行腹腔麻醉，75%乙醇消毒腹部，沿腹白線(xiàn)中段作一長(cháng)1.5 cm的切口,剪開(kāi)皮膚和肌層，探查腹腔分離盲腸，在距盲腸末端1 cm處用3?0絲線(xiàn)結扎盲腸，注意避免結扎盲腸動(dòng)脈及引起腸梗阻，用16 G穿刺針在盲腸游離面（腸系膜對面）上貫穿3次，針孔間距約3 mm，并擠出少許內容物，還納腸管。術(shù)畢逐層關(guān)腹，并于腹壁皮下注射林格液3 ml /100 g抗休克處理。術(shù)后自由進(jìn)食飲水。對照組僅做無(wú)菌開(kāi)腹與盲腸翻動(dòng)。
1.3.2 標本處理：分別于假手術(shù)及CLP術(shù)后12 h處死全部大鼠，剪取右肺組織，常規石蠟包埋，HE染色觀(guān)察肺部病理變化，免疫組化sABC法觀(guān)察Tie?2表達分布，具體步驟按試劑盒說(shuō)明操作。
2 結果
2. 1 肺組織病理學(xué)變化 對照組大鼠肺臟光鏡下肺組織結構清楚，肺間質(zhì)有僅有少許炎性細胞，肺泡壁結構完整，肺泡內未見(jiàn)水腫液及肺泡萎陷（圖1）。模型組光鏡下見(jiàn)肺泡間隔增厚，肺間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細胞及少量巨噬細胞浸潤，部分肺泡萎縮塌陷（圖2）。
2.2 免疫組化病理結果分析 對照組Tie?2主要表達于支氣管上皮細胞（圖3）、內皮細胞（圖4），在支氣管及血管平滑肌細胞亦有較弱的表達，肺泡腔未見(jiàn)有明顯陽(yáng)性表達細胞（圖5）。模型組支氣管上皮細胞表達相對減弱（圖6），在Tie?2陽(yáng)性的炎癥細胞附壁區域，內皮細胞Tie?2表達增強（圖7），在肺泡間隔及肺泡腔內中性粒細胞及巨噬細胞均有強陽(yáng)性的表達（圖8），平滑肌細胞表達未見(jiàn)明顯差別。
3 討論
眾多肺內外因素均可引起ALI，其中sepsis是重要的肺外因素。CLP術(shù)由腸源性感染誘導sepsis致ALI，能較好的模擬疾病的自然病理生理過(guò)程。本實(shí)驗大鼠在CLP術(shù)后12 h肺臟病理變化以肺泡中隔變化為主，表現肺間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細胞及少量巨噬細胞浸潤，肺泡結構破壞，與國外的模型報道相符［2］。Tie?2廣泛表達于成人脈管系統中［3］，對維持正常血管完整性有重要作用。Tie?2配體包括Ang?1、Ang?2、Ang?4，其中Ang?1可以激動(dòng)Tie?2，促進(jìn)內皮細胞遷移，拮抗凋亡，募集血管周?chē)С旨毎�，穩定血管，防止滲漏，Ang?2作用較復雜，通常認為可以抑制Tie?2，對血管起去穩定作用，但在體外實(shí)驗中高濃度或長(cháng)時(shí)間刺激Tie?2時(shí)也可激動(dòng)受體［4，5］，Ang?4可以激動(dòng)Tie?2，但研究較少。最新的研究表明,Ang/Tie?2系統在炎癥反應內皮細胞活化中起重要作用［6］。
Lemieux等［7］通過(guò)RT?PCR、免疫組化及共聚焦顯微鏡首次發(fā)現Tie?2表達于中性粒細胞，且Ang?2可以較弱的激動(dòng)中性粒細胞Tie?2。在內皮細胞Tie?2的活化可誘導P選擇素的定位，導致中性粒細胞粘附能力的增加，而中性粒細胞Tie?2活化可以進(jìn)一步增強其粘附能力。本研究亦發(fā)現在Tie?2陽(yáng)性的中性粒細胞附壁區域，內皮細胞Tie?2亦染色增強，提示兩者Tie?2可能同時(shí)存在活化現象。
Murdoch等［8］通過(guò)體外細胞實(shí)驗發(fā)現低氧血癥能上調單核細胞?巨噬細胞較強強度表達Tie?2，其中組織巨噬細胞有著(zhù)最強的表達，推斷Ang?2可能趨化Tie?2陽(yáng)性單核細胞的游走至炎癥區或腫瘤組織，易化血管新生。本研究亦發(fā)現肺泡巨噬細胞高強度的表達Tie?2，在大血管及支氣管粘膜下層亦有陽(yáng)性表達Tie?2的巨噬細胞，這些細胞作用仍不清楚，是否與ALI損傷后組織修復有關(guān)有待進(jìn)一步研究。
綜上所述，本研究表明ALI時(shí)肺組織中性粒細胞及巨噬細胞表達Tie?2，同時(shí)內皮細胞Tie?2表達增強，Tie?2參與了ALI的病變過(guò)程。
【參考文獻】
［1］ Mahroo M,Thamir N,Salman Q,et al.Regulation of angiopoietin expression by bacterial lipopolysaccharide［J］.Am J Physiol lung Cell Mol Physiol, 2008, 294 (5): L955?963.
［2］ Ozturk E,Demirbilek S,Bege Z,et al.Does leflunomide attenuate the sepsis?induced acute lung injury［J］.Pediatr Surg Int,2008,24:899?905.
［3］ Wong AL,Haroon ZA,Werner S,et al.Tie2 expression and phosphorylation in angiogenic and quiescent adult tissues［J］.Circ Rep，1997,81:567?74.
［4］ Korff T，Kimmina S, Martiny?Baron G,et al.Blood vessel maturation in a 3?dimensional spheroidal coculture model: direct contact with smooth muscle cells regulates endothelial cell quiescence and abrogates VEGF responsiveness［J］.FASEB J,2001,15(2):447?457.
［5］ Teichert?Kuliszewska K, Maisonpierre PC, Jones N,et al.Biological action of angiopoietin?2 in a fibrin matrix model of angiogenesis is associated with activation of Tie2［J］.Cardiovasc Res，2001,49:659?670.
［6］ Fiedler U,Reiss Y,Scharpfenecker M,et al.Angiopoietin?2 sensitizes endothelial cells to TNF?alpha and has a crucial role in the induction of inflammation［Ｊ］.Nat MED, 2006, 12(2):171?172.
［7］ Lemieux CR,Maliba J,Favier JF,et al.Angiopoietins can directly activate endothelial cells and neutrophils to promote proinflammatory responses［J］.Blood, 2005,105 (4):1523?1530.
［8］ Murdoch C,Tazzymans,Webster S,et al.Expression of Tie?2 by human monocytes and their responses to angiopoietin?2［J］.J Immunol, 2007,178(11):7405?7411.
【Tie2在鼠急性肺損傷中的表達及意義】相關(guān)文章：
膽道手術(shù)中的醫源性膽道損傷分析12-11
試論籃球教學(xué)中運動(dòng)損傷的預防論文04-03
無(wú)創(chuàng )通氣對慢性阻塞性肺疾病急性加重期的療效觀(guān)察03-26
學(xué)校體育活動(dòng)中運動(dòng)損傷產(chǎn)生的原因及對策02-25
atRA對動(dòng)脈內皮損傷后平滑肌細胞CDKs表達影響03-29
藝術(shù)實(shí)踐在藝術(shù)教育中的意義12-04
- 相關(guān)推薦